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目的:本文通过对协日嘎-4中化学成分进一步系统分离,并对分离得到的化合物进行富集、纯化,为协日嘎-4后期药效物质基础研究提供依据;课题组前期已对协日嘎-4网络药理学进行了研究,建立了协日嘎-4的化学成分-靶点及化学成分-靶点-疾病的网络模型,结果显示,协日嘎-4有多条途径可以治疗前列腺癌和前列腺增生,反应出中药“多成分、多靶点”的特点,本文将进一步对协日嘎-4中化学成分与前列腺癌和前列腺增生相关受体进行分子对接研究,旨在阐明协日嘎-4与前列腺癌和前列腺增生相关靶点的相互作用和结合模式;通过建立庆大霉素致大鼠肾损伤模型,探索协日嘎-4对肾脏和前列腺的保护作用;高效液相色谱法测定协日嘎-4中4种有效成分的含量;对协日嘎-4进行血清药物化学研究,测定大鼠血清、尿液中总酚酸的含量,并对正常大鼠、模型大鼠血清中总酚酸的药动学进行比较研究。 方法:用大孔吸附树脂(MAR)、MCI树脂、葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)、硅胶柱色谱(SCC)等技术对协日嘎-4进行分离、纯化,通过氢谱、碳谱(1H-NMR、13C-NMR)鉴定化合物的结构。 利用Autodock软件对协日嘎-4中32个化合物分别与雄激素、雌激素、环氧合酶-2、B淋巴细胞瘤-2基因、白介素1、白介素6、白介素8、前列腺酸性磷酸酶、醛糖还原酶9个前列腺癌和前列腺增生相关受体进行分子对接,判断受体与化合物之间结合自由能的大小,并分析二者之间的相互作用力和结合模式。 将大鼠随机分为空白组、模型组、协日嘎-4治疗组、前列舒通组、肾炎消肿片组、强的松组,除正常组以外,所有组大鼠皮下注射庆大霉素诱导急性肾损伤(Acute kidney injury),分别给予相应药物治疗,给药结束后,用ELISA试剂盒检测肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿蛋白(UP)、尿酶(NAG)、肾损伤因子(KIM-1)的表达水平,并计算各组肾脏指数和前列腺指数。 高效液相色谱法(HPLC)测定协日嘎-4中黄芩苷、双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含量。 紫外可见分光光度法(UV)测定大鼠血清、尿液中总酚酸的含量,并对正常大鼠、模型大鼠血清中总酚酸的含量进行药动学研究。 结果:分离得到7个化合物,分别为黄芩苷、姜黄素、双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、汉黄芩素、盐酸小檗碱、栀子苷。 通过协日嘎-4的分子对接研究,结果表明,齐墩果酸与所有受体结合能都较低,汉黄芩素、姜黄素、山奈酚、异鼠李素、大黄素、熊果酸、β-谷甾醇、槲皮素、去甲氧基姜黄素、束骨姜黄醇、异槲皮苷、小檗碱、大黄素甲醚与环氧合酶-2受体、醛糖还原酶受体、雄激素受体、白介素6受体、白介素8受体结合能较低。 通过SPSS方差分析,协日嘎-4对庆大霉素所致肾损伤有很好的保护作用,并对肾损伤导致的前列腺指数增大有一定的治疗效果,其中协日嘎-4治疗组与模型组比,肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿蛋白(UP)、尿酶(NAG)、肾损伤因子(KIM-1)水平均有很大程度的下降,肾脏指数和前列腺指数也有不同程度的下降;本文建立了高效液相色谱法测定协日嘎-4中有效成分含量的方法;建立了紫外可见分光光度法测定大鼠血清、尿液中总酚酸的含量,并对正常大鼠、模型大鼠血清中总酚酸的含量进行药动学比较研究。 结论:通过对协日嘎-4的分子对接研究,阐明了协日嘎-4与前列腺癌和前列腺增生相关靶点的相互作用和结合模式,为后期验证协日嘎-4与前列腺癌和前列腺增生的靶向研究提供参考。协日嘎-4能够对庆大霉素所致肾损伤有很好的保护作用,并对肾损伤导致的前列腺指数增大有一定的治疗效果。对协日嘎-4进行血清药物化学研究,通过模型大鼠与正常大鼠血清中总酚酸的比较研究,阐明协日嘎-4中总酚酸对于治疗非细菌性前列腺炎的相关性。