【摘 要】
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目的:探讨葡萄籽提取物原花青素通过Nrf2-iNOS-HDAC2轴调节哮喘小鼠对激素敏感性的机制及其作用。方法:选择48只8周龄SPF级BALB/c雌性小鼠,随机平均分成6组:对照组,哮喘组,地
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目的:探讨葡萄籽提取物原花青素通过Nrf2-iNOS-HDAC2轴调节哮喘小鼠对激素敏感性的机制及其作用。方法:选择48只8周龄SPF级BALB/c雌性小鼠,随机平均分成6组:对照组,哮喘组,地塞米松组,低、中、高剂量原花青素组。卵白蛋白(OVA)+脂多糖(LPS)哮喘模型。小鼠末次激发24h后,检测小鼠气道阻力;苏木精一伊红(HE)染色观察气道炎性细胞浸润;过碘酸雪夫(PAS)染色观察杯状细胞增生、气道黏液分泌;酶免疫组织化学法检测各组小鼠气道平滑肌层诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的变化;通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠血清中白细胞介素(IL)-8和单核细胞趋化蛋白(MCP)-1水平;实时定量PCR(qRT-PCR)、免疫印迹(Western blot)方法检测各组小鼠肺组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、iNOS、组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)、谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)和调节亚基(GCLM)的表达。结果:与正常对照组相比,哮喘组气道阻力显著增加,地塞米松并不能降低哮喘小鼠的气道阻力,各剂量原花青素组显著降低哮喘小鼠的气道阻力(P<0.05),原花青素高剂量组(200mg/kg)降低气道阻力最明显(P<0.05)。ELISA检测结果显示,原花青素组IL-8、MCP-1的表达明显低于哮喘组(P<0.05)。病理结果显示,哮喘组小鼠气道见大量炎症细胞浸润,管腔狭窄;原花青素(低,中,高剂量)组的气道炎症均低于哮喘组和地塞米松组(P<0.05)。免疫组化检测结果显示,健康对照组小鼠支气管平滑肌层iNOS表达很少,而哮喘组小鼠支气管平滑肌层iNOS表达明显增加(P<0.01);用地塞米松干预后不能减少iNOS的表达;原花青素(低,中,高剂量)组气道平滑肌层iNOS表达较哮喘组和地塞米松组明显减弱(P<0.05)。qRT-PCR、Western blot检测结果显示,与正常对照组相比,哮喘组肺组织iNOS mRNA与蛋白表达均增加(P<0.01);地塞米松不能降低iNOS mRNA与蛋白表达;原花青素干预后iNOS mRNA表达明显降低(P<0.05)。与对照组相比,哮喘组Nrf2、HDAC2、GCLC和GCLM mRNA与蛋白表达均降低,原花青素能使Nrf2、HDAC2、GCLC和GCLM表达增加(P<0.05)。结论:在激素不敏感性哮喘小鼠模型中,原花青素可通过调节Nrf2-iNOS-HDAC2通路的表达从而缓解哮喘小鼠的激素抵抗,具有潜在的临床应用前景。
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