Rab30对神经细胞高尔基体碎裂及细胞凋亡的作用研究

来源 :南华大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:wh_wzy
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目的:探讨Rab30对神经细胞高尔基体碎裂及细胞凋亡的影响。  方法:  1、实验分组:选取处于对数期生长的小鼠海马神经细胞(HT22)进行病毒转染,转染成功后分别将空载组、Rab30过表达组予以浓度为0.2μg/mL毒胡萝卜素(TG)3h、5h干预,具体分6组:正常组、空载组、空载TG3h组、空载TG5h组、Rab30过表达TG3h组、Rab30过表达TG5h组。  2、Western-blot检测各组细胞内 Rab30、GM130的蛋白表达情况;  3、Real-time PCR检测各组细胞内Rab30、GM130的mRNA表达水平;  4、CCK-8法检测各组细胞的活性;  5、免疫细胞化学方法观察各组细胞高尔基体的形态变化;  6、流式细胞仪测定各组细胞凋亡率的变化。  结果:  1、慢病毒转染HT22细胞72小时后,在荧光显微镜下观察空载组和 Rab30过表达组细胞荧光的表达情况,约有超过85%的细胞发出绿色荧光。  2、Western blot检测结果:与正常组或空载组比较,空载TG3h组、空载TG5h组细胞内Rab30、GM130蛋白表达减少(P<0.05)。Rab30过表达TG3h组、Rab30过表达TG5h组细胞内Rab30、GM130蛋白表达显著增加,分别与空载TG3h组、空载TG5h组比较(P<0.05)。  3、RT-PCR检测结果:与正常组或空载组比较,空载TG3h组、空载TG5h组细胞内Rab30、GM130 mRNA表达降低(P<0.05)。Rab30过表达TG3h组、Rab30过表达TG5h组细胞内Rab30、GM130 mRNA表达显著增加,分别与空载 TG3h组、空载 TG5h组比较(P<0.05)。  4、CCK-8结果:与正常组或空载组比较,空载TG3h组、空载TG5h组细胞存活率明显下降(P<0.05)。Rab30过表达 TG3h组、Rab30过表达TG5h组细胞存活率明显上升,分别与空载TG3h组、空载TG5h组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。  5、免疫细胞化学结果显示:正常组或空载组中,TGN38标记的高尔基体结构紧凑,呈新月形紧密围绕在细胞核周围。空载TG3h组,高尔基体由紧凑的囊泡结构向胞浆散开,而空载TG5h组高尔基体碎裂明显增多,大部分呈点状或颗粒状散在整个胞浆中。Rab30过表达TG3h组、Rab30过表达TG5h组,分别与空载TG3h组、空载TG5h组比较,高尔基体碎裂明显减少。  6、流式细胞仪测定结果:与正常组或空载组比较,空载 TG3h组、空载TG5h组细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。Rab30过表达TG3h组、Rab30过表达TG5h组,分别与空载TG3h组、空载TG5h组比较,细胞凋亡率明显下降(P<0.05)。  结论:  神经细胞中Rab30的过表达,可能减少高尔基体的碎裂,降低神经细胞的凋亡。
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