目的:应用基因工程技术制备肿瘤源性重组EPF,将其与弗氏佐剂混合后对BALB/c小鼠进行免疫,并以较为成熟的单克隆抗体杂交瘤技术,建立分泌抗EPF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备EPF单克隆抗体,为进一步探索以EPF单克隆抗体为基础的酶联免疫吸附测定(ELISA)等方法进行超早孕及某些恶性肿瘤等的早期诊断奠定基础。方法:从黑色素瘤标本中提取总RNA,RT-PCR扩增EPF基因,将扩增产物和载体pGEX-5X-1进行双酶切后回收,连接载体和目的片段,获得重组质粒,将重组质粒转化大肠杆菌BL21。在大肠杆菌BL21中通过IPTG进行诱导表达,然后用谷胱甘肽-琼脂糖球珠亲和层析纯化,经Xa酶切得到纯的EPF蛋白。用SDS-PAGE鉴定其纯度,用玫瑰花环抑制试验(RIT)检测其生物学活性。将制备的重组肿瘤源性EPF蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,用免疫后的小鼠脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞(NS-1)融合,并通过间接ELISA方法筛选克隆阳性杂交瘤细胞株,经克隆化,获得可稳定分泌抗EPF单克隆抗体的细胞株。注入BALB/c小鼠腹腔制备腹水型单克隆抗体,经Protein-G亲和层析纯化,SDS-PAGE和Western-blot等方法鉴定EPF单克隆抗体。结果:制备的重组EPF纯度较好,具有良好的免疫原性。融合后经克隆化获得五株稳定分泌抗EPF抗体的细胞株,将细胞注射入BALB/c小鼠腹腔获得腹水型单克隆抗体,以亲和层析法纯化,SDS-PAGE分析显示纯化后去掉大部分杂蛋白,抗体纯度较高,Western-blot分析显示抗体与抗原匹配性良好。结论:制备的重组EPF蛋白纯度高且具有良好的免疫原性。获得五株稳定分泌抗EPF抗体的杂交瘤细胞株。制备的EPF单克隆抗体纯度好,与抗原匹配性良好。