【摘 要】
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采用DNAStar MegAlign中的Clustal W算法比对核苷酸与氨基酸序列,发现AZI1 （AZELAIC ACID INDUCED 1）与EARLI1亚家族其他基因有很高的同源性,AZI1编码产物具有保守的富含脯氨酸结构域和8半胱氨酸基序。通过PLACE数据库对AZI1上游调控序列进行分析,发现该基因启动子中存在冷应答核心元件CCGAC,因此推测AZI1与低温胁迫有关。RNA印迹实验结
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采用DNAStar MegAlign中的Clustal W算法比对核苷酸与氨基酸序列,发现AZI1 （AZELAIC ACID INDUCED 1）与EARLI1亚家族其他基因有很高的同源性,AZI1编码产物具有保守的富含脯氨酸结构域和8半胱氨酸基序。通过PLACE数据库对AZI1上游调控序列进行分析,发现该基因启动子中存在冷应答核心元件CCGAC,因此推测AZI1与低温胁迫有关。RNA印迹实验结果显示AZI1基因确实可以应答低温环境,但需要在4℃处理6小时才能检测到杂交信号。随着处理时间的延长,AZI1 mRNA的丰度缓慢增加,24小时后达到峰值。将冷胁迫植株转移到室温条件下以后,该基因的转录活性逐渐下降,直至恢复到很弱的本底水平。为了了解AZI1基因对拟南芥抗低温特性的影响,本工作以过表达植株、RNA干扰系和T-DNA敲除突变体为材料分析了电解质的渗漏情况,发现过表达株系在冰冻处理后释放的电解质少于野生型对照,而RNA干扰系和T-DNA敲除突变体与对照相比在冰冻处理后释放的电解质较多。为了进一步确定AZI1基因的抗低温功能,用GAL1启动子驱动该基因,对酿酒酵母细胞在冰冻处理后的存活能力进行了研究,发现转AZI1基因酵母的存活率明显高于转空载酵母。对过表达植株、RNA干扰系和T-DNA敲除突变体在生长发育过程中的表型特征进行观察,发现AZI1过表达株系的开花时间与野生型对照相比明显延迟,而T-DNA插入系的开花时间比对照提前一个星期。40天后统计不同株系的抽薹率,发现FLAG327H06-3纯合突变体的抽薹率是野生型Ws的二倍多,SALK017709-1纯合突变体的抽薹率是野生型Col-0的1.5倍,而RNA干扰系100%抽薹时其晚花型对照Col-FRI-Sf2的抽薹率为0。同时还发现,AZI1纯合突变体中的总木质素含量与对照相比明显下降。因此认为除了对低温胁迫具有抗性以外,AZI1基因可能还对开花时间和木质素的积累有直接或间接的影响。
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