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J亚群禽白血病病毒(Subgroup J of Avian Leukosis Virus, ALV-J)是90年代初从商品代肉鸡中分离鉴定出来的禽白血病病毒(Avian LeukosisVirus, ALV)新的亚群,根据病毒中和试验、交叉干扰试验和基因组序列,确定它与经典的ALV不同,ALV-J主要引起肉鸡的骨髓瘤白血病(MyloidLeucosis, ML)。 迄今为止,已有许多关于ALV-J的囊膜糖蛋白基因分子流行病学的报道,在这些报道中,都是比较了大量野毒株的gp85基因的氨基酸序列,并根据其有义突变(NS)与沉默突变(S)的比例来分析gp85基因上存在的高变区,并以此来显示免疫选择压作用在病毒变异和演化中的作用。本试验首次尝试在严格试验控制条件下显示抗体这一免疫选择压对ALV-J变异的影响。 将ALV-J中国分离株NX0101接种7日龄SPF鸡,饲养在SPF隔离罩中,42天后采血,用IFA试验测其对ALV-JNX0101株的抗体效价,取抗体水平最高的一份作为抗体免疫选择压的来源。通过这份血清的病毒中和试验,确定完全抑制病毒复制的最大抗体稀释度为1∶25,用1∶50作为加入到培养基中去的抗体浓度,构成抗体免疫选择压。为了完成该试验,将已完成env基因序列测定的原代病毒NX0101(NX-0)接种鸡胚成纤维细胞(CEF),分为A组(培养基中无抗体)和B组(培养基中含1∶50的抗ALV-J血清),每组设3个独立的传代系列,病毒在细胞上每培养6d记为一代。分别对第10代、第20代和第30代病毒的囊膜糖蛋白(env)基因进行了克隆和测序,并将传代病毒的gp85蛋白的氨基酸序列与原代病毒进行了比较,并通过计算NS与S的比值,以显示抗体免疫选择压对ALV-Jgp85基因变异的影响。 原始病毒与无抗体A组不同传代系列的不同代次之间gp85蛋白的氨基酸序列同源性为97.7%～99.7%;而原始病毒与有抗体B组不同传代系列的不同代次之间gp85的氨基酸序列同源性为93.8%～96.1%;在与不含抗体的细胞上连续传代相比,抗体的存在不仅造成了gp85基因上三个高变区氨基酸变异增多,而且还在aa#143～146的连续四个位点上均出现了完全不同的氨基酸残基;有抗体B组的变异明显要大于无抗体的A组,