Sulfolobus acidocaldarius的两种尿嘧啶DNA糖苷酶的酶学性质研究

来源 :上海海洋大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:zxhua2006
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
极端嗜酸嗜热微生物硫磺矿硫化叶菌(Sulfolobus)生存温度在70~85℃,最适生长pH为2~4的高温高酸的环境中。高温往往容易造成胞嘧啶 dC、腺嘌呤 dA等碱基脱氨基变成尿嘧啶 dU和次黄嘌呤dI。尿嘧啶dU和次黄嘌呤dI这两种损伤型碱基如果不被修复,会在下一轮复制中造成碱基突变。尿嘧啶 dU与dA配对,造成 G:C→A:T突变,次黄嘌呤则可以与四种碱基配对,造成 A:T突变成 G:C、C:G、T:A。高温环境会极大地加快细胞内碱基脱氨基的速度,因此极端嗜高温微生物面临着很大的脱氨基损伤压力。为了适应这样的高温生存环境,极端嗜高温微生物已经进化出完善的DNA损伤修复系统来应对这些脱氨基损伤。其中1)dUTPase水解dUTP,生成 dUDP和磷酸,消除有害的dUTP;2)尿嘧啶 DNA糖苷酶(uracil-DNA glycosylase,UDG)从 DNA中切除损伤碱基 dU,生成无碱基位点。尿嘧啶糖苷酶从 DNA中切除 dU损伤后,碱基切除修复系统的其他蛋白共同完成整个修复事件。其中 AP内切核酸酶在 AP位点处切断DNA,形成3’羟基与5’磷酸的缺口;DNA聚合酶在缺口处加入一个或数个正确配对的核苷酸;DNA连接酶连接缺口,完成整个碱基切除修复反应。为了阐明极端嗜酸嗜热微生物Sulfolobusacidocaldarius(S.acidocaldarius)的碱基切除损伤修复机制,我们初步克隆了参与S.acidocaldarius碱基切除修复的udgIV,udgV基因,体外鉴定了硫磺矿硫化叶菌DNA糖苷酶的酶学特性。结果表明硫化叶菌的两种DNA糖苷酶均具有推测的尿嘧啶 DNA糖苷酶活性。硫化叶菌的UDG蛋白催化反应的最适 pH值和反应温度分别为 pH8.5和65℃。金属二价离子对硫化叶菌的两种UDG催化反应具有一定影响:实验中测定的二价金属离子Ni2+,Cu2+,Co2+,Zn2+对硫化叶菌的两种糖苷酶的催化反应表现出明显的抑制作用;NaCl离子强度高于0.05mol/L以上能够抑制UDGIV和UDGV的活性。UDGIV催化速度比UDGV快,UDGIV和UDGV的比活性分别为1*106U/mg和1333 U/mg。所以S.acidocaldariusUDGIV的催化效率高于UDGV,约为UDGV的750倍。S.aciUDGIV在反应温度低于75℃时热稳定性明显高于S.aciUDGV。  硫化叶菌的两种 UDG的催化反应受 dU损伤碱基互补的碱基种类的影响,切割活性顺序是:U/C≥U/T>U/G>ssDNA≥U/A。将 DNA底物中的dU碱基两侧的磷酸基团的一个氧原子替换成硫原子极大地降低了两种糖苷酶的切割活性,表明 dU损伤碱基两侧的磷酸基团的确参与糖苷酶UDG与底物DNA的相互作用。S.acidocaldarius编码的三种 DNA聚合酶对UDGIV和UDGV的催化活性有不同的影响。提示了它们和DNA的结合机制与糖苷酶不同,或者糖苷酶活性的稳定需要更多的修复蛋白的参与协助。
其他文献
对于进气道喷射式汽油发动机起动过程的排放问题的研究一直在进行,参数多变性、非线性、时滞性是其固有瞬态特征。对于混合动力汽车用汽油机,起动过程是由起动/发电一体化电机(
随着社会的的发展,国家对于教育行业越来越重视,制定了需要相对的政策来推动教育的改革,数字化教育资源建设对于教育改革有着非常中要的推动作用,数字化也在各行各业中占有十
本文围绕智能材料二氧化钒(VO2)微/纳米线进行了深入的探讨和研究,制备合成了单晶二氧化钒微/纳米线,深入探索了这种纳米材料的晶体结构,相变机理,力学性能,热电性能和压力.
本论文较系统地研究了牡蛎胰蛋白酶抑制剂(oyster trypsin inhibitor, OTI)的制备、分离纯化方法及其部分性质和抗肿瘤活性,为进一步探讨胰蛋白酶抑制剂结构与功能间的关系提供了基础数据,也为抗肿瘤药物的开发提供了一个新途径。本文包括以下6个部分研究内容:1.利用胰蛋白酶对底物BAEE的催化水解产物在波长253 nm处有紫外吸收的原理,建立了胰蛋白酶抑制活性的测定方法。以抑制率为
高职是培养技能型人才的主要阵地,为社会提供了大量的专业人才,对推动社会稳定发展有重要的意义.在新课程改革不断深化的今天,高职院校为了能够满足不同需求的学生,中医药专
在大数据和AI技术浪潮中,计算机应用能力是人们适应社会必须的重要基本技能.职业院校各专业都开设计算机应用基础课必修课,本文将探讨分拆大学科体系结构的计算机基础课程,通
中华民族五千年的历史文化为我们留下了丰富的遗产,对于我们的思维方式、道德观念、行为习惯等具有重要的影响力,很多优秀的传统文化仍然影响着当代中国人,德育工作及其管理
家长学校是指导家庭教育的主要渠道,起到提高家长素质、传播家庭教育理念知识方法、促进学生全面发展的重要作用.同时,家长学校作为公益性的非政府组织,普遍存在家长对家长学
随着新教改的不断深化,小学语文教师不断利用新型的教学方法和教学手段提高语文课堂教学的效率.小学生年龄较小,注意力无法长时间集中,教师需要合理的利用精心设计的微课,让
随着当前社会形势的飞速发展,各地的实际施工状况也不尽相同,所以土建工程在施工管理上存在着很大的难度,各方面原因的综合作用造成了工程整体质量的下滑.建筑土建工程的现场