GPSM2的低表达对胰腺癌生长及化疗敏感性的影响

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目的:  本实验通过建立G蛋白信号调节因子2 ( G protein signaling modulator 2 , GPSM2)低表达的胰腺癌细胞株,并鉴定细胞株建立成功。然后构建GPSM2低表达和自然表达的胰腺癌裸鼠模型,以胰腺癌一线化疗药物吉西他滨作为干预因素,探究GPSM2的低表达对胰腺癌生长及化疗敏感性的影响。为提高胰腺癌的治疗效果、判断预后寻找有效指标和提供新的研究思路。  方法:  利用江苏齐氏生物技术科技有限公司构建的GPSM2 低表达慢病毒载体(GPSM2-homo-1211)转染人胰腺癌MIA-PaCa-2细胞株,将得到的GPSM2低表达胰腺癌细胞株(shRNA GPSM2)作为实验组细胞,阴性序列重组载体(shNC)转染的细胞株(shRNA NC)为阴性对照组,人胰腺癌MIA-PaCa-2细胞株作为空白对照组。RT-PCR、Western Blot技术检测实验组、空白对照组以及阴性对照组细胞中GPSM2 mRNA及GPSM2蛋白的表达水平,以此鉴定GPSM2低表达胰腺癌细胞株的构建成功。将裸鼠16只,随机均分为2组(每组8只),一组裸鼠右侧腋窝皮下均接种0.2 mL浓度为5×106/mL的实验组细胞悬液(每只裸鼠接种1×106个细胞)得到GPSM2低表达胰腺癌裸鼠模型;另一组裸鼠右侧腋窝皮下均接种0.2 mL浓度为5×106/mL的空白对照组细胞悬液(每只裸鼠接种1×106个细胞)得到GPSM2自然表达胰腺癌裸鼠模型。裸鼠模型构建两周后,将GPSM2低表达组和GPSM2自然表达组裸鼠再各自均分为两组。采用腹腔注射的给药方式,一组注射吉西他滨,每次注射剂量为100 mg/KG,每周注射三次(每周一、三、五各注射一次),连续注射4周。另一组注射生理盐水,同样每次注射剂量为100 mg/KG,每周注射三次(每周一、三、五各注射一次),连续注射4周。每次注射后观察各组裸鼠生长情况,有无不适反应。每周首次注射前及每次注射24 h后用游标卡尺测量并记录各组裸鼠瘤体长径及短径,末次注射后第三天处死裸鼠,取瘤体测量瘤体长短径(共测量16次)。按瘤体体积V=a2×b/2(a为瘤体短径、b为瘤体长径)公式计算瘤体体积,并以裸鼠瘤体体积的平均值绘制肿瘤生长曲线。  结果:  1、成功构建GPSM2低表达胰腺癌细胞及裸鼠模型。  2、裸鼠瘤体体积生长速度及瘤体体积大小为 GPSM2 自然表达+生理盐水组>GPSM2自然表达+吉西他滨组>GPSM2低表达+生理盐水组>GPSM2低表达+吉西他滨组。GPSM2自然表达+吉西他滨组裸鼠瘤体体积较GPSM2自然表达+生理盐水组明显减小(P<0.01)。GPSM2低表达+生理盐水组裸鼠瘤体体积较GPSM2自然表达+生理盐水组、GPSM2自然表达+吉西他滨组均明显减小(均P<0.01)。GPSM2低表达+吉西他滨组裸鼠瘤体体积分别与GPSM2自然表达+吉西他滨组、GPSM2低表达+生理盐水组比较,均明显减小(均P<0.01)。  3、析因设计方差分析法分析各因素主效应及交互效应结果示:(1)注射吉西他滨对于裸鼠瘤体生长抑制作用的主效应具有明显意义(F=52.985,P<0.01)。(2) GPSM2的低表达对于裸鼠瘤体生长抑制作用的主效应具有明显意义(F=284.253, P<0.01)。(3)注射吉西他滨与抑制GPSM2的表达对于抑制裸鼠瘤体生长的交互效应尚未具有统计学意义(F=3.871,P>0.05)。  结论:  1、GPSM2的低表达对胰腺癌生长具有抑制作用。  2、GPSM2的低表达对于增强胰腺癌化疗敏感性的作用尚不明显。  3、抑制GPSM2表达的同时予以化疗对于抑制胰腺癌生长的效果较单独抑制GPSM2表达或单独化疗更为有效,对于增加胰腺癌的治疗疗效同样具有重要作用,可能与抑制GPSM2的表达同化疗药物联用后相叠加共同抑制胰腺癌生长有关。
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