目的观察艾司西酞普兰(ESC)对神经干细胞(NSCs)的存活、增殖及向神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞分化的影响方法1 NSCs的分离与培养,将4只新生SD大鼠断头,取出海马组织,于解剖显微镜下剥离血管与脑膜,机械分离海马组织制备单细胞悬液,采用无血清培养技术,纯化、分离培养NSCs,3d半量补液,7d传代。2实验分为两组,分别是对照组和艾司西酞普兰干预组(ESC组)。对照组是传代至第3代的NSCs仍由无血清的NSCs培养基继续培养;ESC组是传代至第3代的NSCs加入不同浓度ESC干预,ESC的浓度分别为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L。3用MTS检测不同浓度ESC对海马NSCs的存活率的影响;生长曲线、免疫荧光法、RT-PCR检测两组神经球Nestin表达水平,对增殖的影响;免疫荧光检测ESC对海马NSCs的贴壁诱导后GFAP、MAP-2及O4的表达情况;RT-PCR检测ESC对海马NSCs贴壁诱导的GFAP、MAP-2的表达水平。4使用SPSS 21.0软件进行数据分析,实验结果用均数±标准差表示,两组间比较采用t检验,多组间比较行单因素方差分析并SNK进行多组间比较,重复测量数据采用多因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果1 NSCs的培养及鉴定培养5-7d,神经球由20-35个细胞聚集,成不规则球状,大小不一,细胞状态良好。传代后继续观察培养,神经球呈规则圆形,体积明显增大,折光性强,内部结构清晰,用干细胞标志物巢蛋白Nestin对第3代细胞进行染色,结果显示神经球内大多数细胞呈Nestin染色阳性。在ESC诱导过程中,第7d镜下可见神经球周围爬出密密麻麻的神经细胞,并可见明显的胞体及突起,突起交织呈网络状。2 MTS检测各组NSCs的存活率5μmol/L、10μmol/LESC组的细胞存活率较对照组略有增加,差异均无统计学意义(P>0.05);20μmol/L、40μmol/L ESC组的细胞存活率较对照组明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05),但20、40μmol/L ESC组间无统计学意义(P>0.05)。3 ESC对NSCs增殖的影响,1)两组细胞持续增长,ESC组较对照组细胞活力明显增强,斜率增大(P<0.05)。2)对照组和ESC组(浓度20μmol/L)进行Nestin免疫荧光染色,ESC组神经球Nestin阳性个数高于对照组(P<0.05)。3)NSCs经ESC培养7d后,ESC组Nestin的m RNA相对表达量明显高于对照组(P<0.05)。4.免疫荧光染色检测细胞分化时结果显示ESC组MAP-2、GFAP和O4表达呈强阳性。分化7d后,MAP-2的m RNA表达量明显高于对照组(P<0.05)。结论ESC对NSCs的存活、增殖及向神经元分化具有促进作用。图6幅;表4个;参106篇。