耐有机溶剂微生物是一类新颖的极端微生物,直到20世纪80年代才被系统深入地研究。它们通过各种耐受机制,有效抵御或降低有机溶剂对其细胞产生的毒害作用。因此,在全细胞催化、环境污染治理等领域,耐有机溶剂极端微生物具有广阔的工业应用前景。本实验通过定向筛选得到一株具有产脂肪酶能力并且对苯类及一些烷烃类具有有机溶剂具有耐受性的伯克霍尔德菌种Burkholderia sp.SIB005,鉴于伯克霍尔德菌种脂肪酶复杂的分泌机制以及需要同源伴侣蛋白的参与,因此,本实验选择通过同源表达的方式来进一步提高Burkholderia sp.SIB005脂肪酶的活力。为了实现该菌株的脂肪酶基因高效表达,通过克隆Burkholderia sp.SIB005的脂肪酶基因和伴侣基因以及上游启动子区域(lipAB)和Burkholderia sp.SIB005的脂肪酶基因以及上游启动子区域(lipA),分别与低拷贝表达质粒pBBR22b连接转化至E.coli DH5a,提取质粒并通过电转化方式将两种重组表达质粒转至SIB005菌株,成功构建含有pBBR22b-lipAB、pBBR22b-lipA两种表达质粒的工程菌株。在同一条.件下测定上述两工程菌株及SIB005菌株脂肪酶活力,通过比较,前两者脂肪酶活力在SIB005最高初始酶活的基础上分别提高了88%和25%,实验表明,脂肪酶基因的高效表达与脂肪酶伴侣蛋白密不可分。通过增加脂肪酶基因和伴侣基因以及上游启动子的拷贝数,成功实现了SIB005菌株脂肪酶的同源高效表达。