【摘 要】
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本文主要研究薯蓣皂苷糖苷酶基因的亚克隆及在大肠杆菌和巴斯德毕赤酵母菌中的表达。将含有薯蓣皂苷糖苷酶基因的宿主菌大肠杆菌进行诱导培养,提取的菌体进行破壁、分离后得
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本文主要研究薯蓣皂苷糖苷酶基因的亚克隆及在大肠杆菌和巴斯德毕赤酵母菌中的表达。将含有薯蓣皂苷糖苷酶基因的宿主菌大肠杆菌进行诱导培养,提取的菌体进行破壁、分离后得到表达产物,并对该表达产物进行酶活性检测和SDS-PAGE分析。对薯蓣皂苷葡萄糖苷酶基因进行真核亚克隆,构建重组表达质粒,经线性化和乙醇精制回收后电转化至巴斯德毕赤酵母GS115感受态细胞中,然后进行PCR筛选阳性克隆。筛出的菌用BMGY培养基进行生长阶段的培养,然后换BMMY培养基进行诱导阶段的培养,此阶段加入甲醇作为诱导剂进行该基因的诱导表达,并对进行培养条件的优化实验和空白对照实验。研究结果表明,薯蓣皂苷糖苷酶基因在大肠杆菌中表达出的酶蛋白没有活性,而在巴斯德毕赤酵母表达出的酶蛋白经酶活性检测,发现具有薯蓣皂苷糖苷酶的活性,且培养的最佳提取时间为144 h、甲醇浓度为0.5%,在此基础上,经SDS-PAGE分析,确定其分子量为58 kDa,与理论值基本相符,表明该基因得到了表达。
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