荔枝（Litchi chinensis Sonn.）是无患子科荔枝属常绿乔木,原产于中国南部。在我国有悠久的栽培历史,主要分布于广东、广西、福建、海南、四川、云南和台湾等省,是我国南方的特色大宗水果。荔枝是典型的具假种皮果实,胚珠发育为种子,可食部分是假种皮（果肉）,子房壁发育为果皮。荔枝的果皮色泽类型多种多样,主要有鲜红,紫红色,也有果实成熟时不着色或着色不均匀的品种。水果果皮颜色很大程度上决定了其外观品质,影响果品的商品价值。液泡中积累花色苷是荔枝果皮的主要显色成分,它的合成是一个非常复杂的过程,受到多种因素的影响,由内外因子共同控制。随着研究的深入,影响花色苷生物合成的关键结构基因和调节基因相继被揭示。MYB转录因子是植物花色苷生物合成的调控因子,该转录因子通过激活下游的花色苷生物合成结构基因调控花色苷的积累,然而,MYB转录因子的上游基因则研究较少。本文在分析荔枝基因组中所有含有NAC保守结构域成员的基础上,以不同荔枝品种果实为主要实验材料,通过同源比对和转录组数据分析,克隆了6个可能与花色苷积累相关的NAC家族的候选基因,进一步利用基因表达和花色苷积累关联分析,同时运用酵母单杂交和双荧光素酶报告基因实验技术进一步鉴定与荔枝花色生物合成调控因子MYB启动子互作的NAC调控因子。筛选出参与调控荔枝花色苷生物合成调控因子MYB表达的NAC调节基因,为荔枝果实色泽的改良提供了新的思路和研究方向。主要的研究结果如下:1、根据NAC家族基因N端含有高度保守的NAC结构域,在荔枝‘妃子笑’基因组测序数据库中进行筛选,得到50个很可能是荔枝NAC家族基因。对这50个假定荔枝NAC基因进行聚类分析,可以明显分为6个亚族。进一步根据桃子和拟南芥中调控花色苷生物合成的NAC基因序列相似性以及荔枝果皮发育三个阶段的转录组数据分析结果进行筛选。分析整理后,得到6个很可能参与荔枝花色苷生物合成调控的NAC基因。2、提取荔枝?妃子笑?果皮总RNA,反转录成c DNA为模板,成功的克隆了与其他物种调控花色苷生物合成的NAC相似度高的6个荔枝NAC成员,分别命名为Lc NAC1、Lc NAC2、Lc NAC3、Lc NAC4、Lc NAC5和Lc NAC6。3、通过qCR分析了6个候选NAC基因在不同组织和发育阶段的表达水平,结果显示Lc NAC4、Lc NAC5和Lc NAC6在果皮中高表达,且随着果皮成熟着色这三个基因表达增加。说明这三个基因可能是参与花色苷生物合成的关键成员。4、构建转基因载体pcambia1300-Ca MV35S-Lc NAC1-6和双荧光素酶报告基因实验载体p Green II 0800-Lc MYB1 promoter-LUC,在本氏烟草中进一步验证NAC转录因子对Lc MYB1表达的调控作用,发现Lc NAC4、Lc NAC5和Lc NAC6可明显激活Lc MYB1的表达。5、构建了pAb Ai-LcMYB1 promoter和pGADT7 AD-Lc NAC1-6酵母载体,通过酵母单杂交实验验证NAC转录因子与Lc MYB1启动子的互作反应。实验结果显示,只有候选基因Lc NAC5与转录调控因子Lc MYB1的启动子有互作反应。