野生大豆GsGIS3基因耐酸铝功能研究

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:archer_zhang
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铝毒会在酸性条件下限制了植物根系的生长,并且极大限制了酸性土壤的农业生产。C2H2锌指蛋白转录因子(Zinc finger protein)是植物中最大的转录因子家族之一,在植物发育和胁迫反应中发挥着多种作用。本研究从野生大豆BW69耐酸铝基因表达谱克隆基因GsGIS3,并对其生物学功能作进一步分析研究,主要结果如下:通过生物信息学分析,GsGIS3基因名是LOC100811796,蛋白登录号为XP_003536676.1,其开放阅读框长度为852 bp,编码283个氨基酸,GsGIS3蛋白包含一个25个氨基酸的zf-C2H2-6的结构域。通过构建瞬时表达载体,使GsGIS3基因在烟草下表皮细胞转化,激光共聚焦显微镜观测结果表明,GsGIS3蛋白被定位在细胞核。采用qRT-PCR(Quantitative Real-time PCR)技术进行表达模式分析,发现基因GsGIS3在根和茎中的表达量相对较高,在叶中表达量最低,并且在2-4 cm的根尖表达量最高。不同铝浓度处理都能诱导GsGIS3基因的表达,并且对于不同铝浓度胁迫,GsGIS3基因的表达量呈现先上升后下降的趋势,在50μM AlCl3(pH4.5)浓度时表达量达到了最高水平,约为对照的5.5倍。随后检测了GsGIS3基因在不同铝处理时间的表达情况,结果表明,GsGIS3基因的表达量随时间的增加呈现出先迅速上升后逐渐下降的趋势,并且在6小时的时间点表达量达到最高水平,约为对照处理的5倍。对GsGIS3基因的逆境胁迫响应及表达模式进行分析,发现在NaCl和GA3胁迫下表达均显著上调。构建过表达载体和干扰载体转化发根农杆菌K599,利用发根农杆菌诱导大豆毛状根转化,发现在铝处理下,在经过苏木精染色后,过表达株系毛状根根尖着色最浅,而干扰株系毛状根根尖着色最深。通过异源转化拟南芥,筛选出5个过表达株系,在100μM AlCl3(pH4.5)条件下野生型株系的主根平均根长为3.8 cm,而转基因株系的主根根长为5.5-5.8 cm,转基因株系的主根长度明显大于野生型。通过水培实验观察拟南芥根系,结果表明转基因拟南芥与野生型相比具有更多的总表面积和总根长。且GsGIS3转基因植株中的游离脯氨酸含量高于野生型拟南芥;丙二醛含量则低于野生型拟南芥。进一步发现铝胁迫后,在GsGIS3过表达植株中,与铝响应响应相关的基因ALMT、ALS3和赤霉素合成相关基因GA2OX1、GA3OX1、GIDI的表达发生了改变,其中ALMT、ALS3和GA2OX1、在过表达系中的表达量在铝处理后明显高于野生型,而GA3OX1和GIDI在过表达系中的表达量在铝处理后明显下降。
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