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本试验的主要研究目的是,通过对全混合日粮(total mixed ration, TMR)发酵过程中蛋白降解特性的研究以及产蛋白酶优势菌的筛选、鉴定,诠释发酵TMR蛋白降解的机理,为进一步抑制发酵TMR的蛋白降解,解决实际应用问题提供坚实的理论依据。试验一分别设置了水分含量为375g/kg、432g/kg以及483g/kg的TMR为LML、 MML以及HML处理组,研究不同水分含量的TMR在发酵过程中非蛋白氮(Non protein nitrogen, NPN)、肽氮(Peptide nitrogen, Peptide-N)、游离氨基酸氮(Free amino acid nitrogen, FAA-N)以及氨态氮(Ammonia nitrogen, NH3-N)的含量的动态变化,以研究不同水分含量对发酵TMR蛋白降解的影响。结果表明,TMR发酵过程中蛋白降解现象显著,而较低的水分含量能够有效抑制蛋白质的水解。试验二以豆浆渣为主要原料,分别以苜蓿干草、羊草干草为主要粗饲料调制TMR,研究不同粗饲料来源的TMR在发酵过程中蛋白降解的动态变化。结果表明,在发酵过程中,苜蓿组及羊草组TMR均发生蛋白降解,NPN含量显著升高,Peptide-N为NPN的主要组分,其含量在两组发酵TMR中均呈现先显著升高,发酵后期保持相对稳定的变化过程,苜蓿组、羊草组TMR发酵过程中FAA-N及NH3-N含量均显著升高。试验三研究了不同粗饲料来源的TMR发酵过程中微生物蛋白酶活性及组成的动态变化。结果表明,在TMR发酵过程中,微生物蛋白酶活性呈现先迅速升高后逐渐下降的总体变化趋势,金属蛋白酶、丝氨酸蛋白酶发挥主要作用：苜蓿组发酵TMR的蛋白酶活性在1d时达到最大值,为2.66U,且具有较高的金属蛋白酶相对活性,3d时苜蓿组发酵TMR中蛋白酶组成发生显著变化,丝氨酸蛋白酶相对活性显著升高；羊草组TMR在发酵3d时蛋白酶活性达到最大值,为3.78U,金属蛋白酶发挥主要作用,5d时丝氨酸蛋白酶的相对活性显著升高。试验四对不同粗饲料来源的发酵TMR中产蛋白酶优势菌群的演替规律及其酶学性质进行了研究。结果表明,在TMR发酵过程中,发酵前期好氧细菌迅速增殖是蛋白酶活性显著升高的主要原因：苜蓿组发酵TMR中,Curtobacterium flaccumfaciens在发酵前期数量显著升高,金属蛋白酶相对活性较高,pH6.0及pH5.0条件下均具有蛋白酶活性,为苜蓿组TMR发酵前期的微生物蛋白酶的主要来源：羊草组发酵TMR中,Paenibacillus amylolyticus、Pae. borealis、 Pae. xylanexedens及Pae. turicensis为产蛋白酶优势菌,金属蛋白酶相对活性较高,在pH7.0-pH5.0条件下均具有蛋白酶活性,为羊草组TMR发酵前期蛋白酶的主要来源。随着发酵的进行,乳酸菌取代好氧细菌成为产蛋白酶优势菌,在苜蓿组TMR发酵后期,Enterococcus. faecium蛋白酶活性强,pH4.0条件下具有蛋白酶活性,为微生物蛋白酶主要来源,在羊草组TMR发酵后期,E. faecalis、 E. faecium为蛋白降解的主要原因。综上所述,TMR发酵过程中由于微生物及其蛋白酶作用会发生蛋白降解,微生物蛋白酶活性先显著升高后逐渐下降。发酵前期好氧细菌迅速增殖是蛋白酶活性显著升高的主要原因,发酵后期乳酸菌为蛋白酶的主要来源。苜蓿组TMR发酵前期,C. flaccumfaciens的增殖导致其蛋白酶活性显著升高,发酵后期,E. faecium为其微生物蛋白酶的主要来源；羊草组TMR发酵前期,Pae.amylolyticus、 Pae. borealis、 Pae. xylanexedens及Pae. turicensis为产酶优势菌,发酵后期则由E.faecalis、 E. faecium发挥蛋白降解的主要作用。