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基因表达是遗传信息的转录和翻译过程，可以在不同的水平上进行调控。其中，转录水平的调控是表达水平调控的关键环节，也是当前研究的重点。C/EBPs(CCAATenhancer binding proteins)是一类与DNA增强子区域结合的转录因子家族，C/EBPβ是该家族的一个重要成员，其C端具有高度保守的DNA结合域和二聚化功能域。它主要通过对靶细胞基因转录的调节，参与细胞增殖与分化、肿瘤发生与凋亡、细胞周期调控等重要生命活动。C/EBPβ的异构体之一LIP不具有N端的激活功能域，只有C端的DNA结合域。在体外，野生型的LIPwt的DNA结合能力很低，而其突变体LIPM(Thr179/188Asp)却具有很强的DNA结合能力，其机制目前还没有报道。为了研究LIPwt和LIPM与DNA结合能力的差异，我们计划用NMR技术来研究其相关的复合物三维溶液结构，以期解释其机理。本论文工作侧重于前期的蛋白质制备与初步的功能研究，主要内容分为两部分：
(1)LIPwt和LIPM蛋白样品制备与纯化：利用分子克隆技术，构建了含SUMO标签的pSMT3/LIPwt和pSMT3/LIPM重组表达质粒。将构建的质粒转化到宿主菌Rossetta(DE3)中，从诱导温度、诱导剂IPTG的浓度和诱导时间等方面对目的蛋白可溶性表达条件进行了优化。为了获得大量而稳定的目的蛋白，在纯化蛋白时，进行了缓冲液、不同层析方法的筛选，解决了蛋白稳定性差的问题。目的蛋白经过亲和镍柱、CM离子交换柱和凝胶过滤色谱纯化，最终得到了符合NMR采样标准的稳定的高浓度蛋白。
(2)LIPwt和LIPM蛋白功能初步研究：首先对LIPwt进行体外磷酸化(LIPwt P)，然后采集了LIPwt、LIPM和LIPwt P自由态和复合态的1H-15N HSQC谱图，考察它们与DNA相互作用能力的强弱，结果显示LIPwt、LIPM和LIPwt P三者都与DNA有相互作用，其机制仍不是很清楚，有待于核磁信号的归属的研究。