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第一部分 细胞焦亡参与H9C2细胞缺氧/复氧损伤目的:研究细胞焦亡是否参与H9C2细胞缺氧/复氧损伤。方法:取大鼠心肌细胞株(H9C2细胞),构建缺氧/复氧损伤模型,设置不同的时间梯度,通过Western Blot检测caspase-1和GSDMD的表达水平,通过qPCR检测IL-18、IL-1β的表达水平。结果:H9C2细胞缺氧/复氧损伤模型中,caspase-1、GSDMD、IL-18和IL-1β的表达具有先升高后下降的趋势,复氧6小时时表达水平达高峰,高峰处细胞焦亡相关蛋白、分子的表达水平均明显高于对照组(P均<0.05)。结论:细胞焦亡参与H9C2细胞缺氧/复氧损伤。第二部分 LncRNAKCNQ1OT1调节H9C2细胞缺氧/复氧损伤中的细胞焦亡目的:探讨LncRNA KCNQ1OT1的表达水平对H9C2细胞缺氧/复氧损伤中细胞焦亡的影响。方法:取H9C2细胞分为4组:空白对照组(control组)、缺氧/复氧损伤组(H/R组)、阴性对照+缺氧/复氧损伤组(NC+H/R组)、抑制LncRNAKCNQ1OT1表达+缺氧/复氧损伤组(si-KCNQ1OT1+H/R组)。采用细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞活性;通过细胞免疫荧光检测NLRP3、IL-1 β的表达;通过qPCR检测LncRNA KCNQ1OT1、miR-214-3p,caspase-1、GSDMD、NLRP3、IL-18、IL-1β 的表达;通过Western Blot 检测 caspase-1、GSDMD、NLRP3、IL-18、IL-1β 的表达水平。结果:1.H9C2细胞缺氧/复氧损伤模型中,LncRNAKCNQ1OT1的表达水平较空白对照组增高(P<0.05)。2.转染si-KCNQ1OT1,转染效率及细胞存活率均可达70%以上,且LncRNA KCNQ1OT1的表达水平较对照组成功被抑制(P<0.05),同时miR-214-3p的表达水平则增高(P<0.05)。3.H9C2细胞缺氧/复氧损伤后,细胞活性降低,抑制LncRNA KCNQ1OT1的表达后,细胞活性较NC+H/R组升高(P<0.05)。4.细胞免疫荧光显示H9C2细胞缺氧/复氧损伤后,细胞内NLRP3、IL-1β的表达增高,抑制LncRNAKCNQ1OT1的表达后,NLRP3和IL-1β的表达降低。5.H9C2 细胞缺氧/复氧损伤模型中,caspase-1、GSDMD、NLRP3、IL-18、IL-1β的分子表达水平与蛋白表达水平增高(P<0.05),抑制LncRNA KCNQ1OT1的表达后,其表达水平均较NC+H/R组明显降低(P<0.05)。结论:LncRNAKCNQ1OT1负向调节miR-214-3p的表达,同时正向调节H9C2细胞缺氧/复氧损伤中细胞焦亡的发生。第三部分miR-214-3p调节H9C2细胞缺氧/复氧损伤中细胞焦亡的发生目的:探讨miR-214-3p的表达水平对H9C2细胞缺氧/复氧损伤中细胞焦亡的影响。方法:取H9C2细胞分为5组:空白对照组(control组)、缺氧/复氧损伤组(H/R组)、阴性对照+缺氧/复氧损伤组(NC+H/R组)、下调miR-214-3p表达+缺氧/复氧损伤组(AMO-214-3P+H/R组)和上调miR-214-3p表达+缺氧/复氧损伤组(miR-214-3p mimics+H/R组)。采用细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞活性;通过qPCR 检测 LncRNAKCNQ1OT1、miR-214-3p、caspase-1、GSDMD、NLRP3、IL-18、IL-1β的表达水平。结果:1.H9C2细胞缺氧/复氧损伤模型中,miR-214-3p的表达水平较空白对照组降低(P<0.05)。2.转染miR-214-3p mimics、AMO-214-3P,转染效率及细胞存活率均可达70%以上,且miR-214-3p mimics能够促进miR-214-3p的表达水平,同时LncRNA KCNQ1OT1的表达水平降低;AMO-214-3P能够抑制miR-214-3p的表达,同时LncRNAKCNQ1OT1的表达水平则升高(P均<0.05)。3.H9C2细胞缺氧/复氧后细胞活性与miR-214-3p的表达水平正相关(P<0.05)。4.H9C2细胞缺氧/复氧损伤模型中,上调miR-214-3p表达后,caspase-1、GSDMD、NLRP3、IL-18、IL-1β的分子表达水平较阴性对照组明显降低(P<0.05)。5.H9C2细胞缺氧/复氧损伤模型中,抑制miR-214-3p的表达后,caspase-1、GSDMD、NLRP3、IL-18、IL-1β的分子表达水平均较阴性对照组明显增高(P<0.05)。结论:miR-214-3p的表达水平与H9C2细胞缺氧/复氧损伤中细胞焦亡相关分子的表达水平负相关,同时LncRNAKCNQ1OT1的表达水平与miR-214-3p的表达水平负相关。第四部分LncRNA KCNQ1OT1/miR-214-3p ceRNA调控网络调节H9C2细胞缺氧/复氧损伤中的细胞焦亡目的:进一步验证LncRNA KCNQ1OT1/miR-214-3p ceRNA调控网络调节H9C2细胞缺氧/复氧损伤中的细胞焦亡。方法:取H9C2细胞分为3组:抑制KCNQ1OT1表达+缺氧/复氧组(si-KCNQ1OT1+H/R组)、抑制KCNQ1OT1表达+抑制miR-214-3p表达+缺氧/复氧组(si-KCNQ1OT1+AMO-214-3P+H/R 组)、抑制 miR-214-3p 表达+缺氧复氧组(AMO-214-3P+H/R组)。采用细胞增殖及毒性检测试剂盒检测细胞活性,通过Western Blot检测caspase-1、GSDMD、NLRP3、IL-18、IL-1β 的表达水平。结果:1.si-KCNQ1OT1+AMO-214-3P+H/R 组细胞活性较 si-KCNQ1OT1+H/R 组低,较 AMO-214-3P+H/R 组高(P 均<0.05)。2.si-KCNQ1OT1+AMO-214-3P+H/R组细胞焦亡相关分子表达水平较si-KCNQ1OT1+H/R 组增高,(P<0.05),较 AMO-214-3P+H/R 组降低(P<0.05)。结论:共转染后,si-KCNQ1OT1+H/R组细胞焦亡相关分子表达水平被反转,同时AMO-214-3P+H/R组细胞焦亡相关分子表达水平也被反转,提示LncRNA KCNQ1OT1可能作为miR-214-3pceRNA,调节H9C2细胞缺氧/复氧损伤模型中的细胞焦亡。