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目的重型肝炎病因多样,在我国主要由病毒性肝炎引起,临床上缺乏特异而有效的治疗靶点和干预手段,绝大部分患者预后不良。病理形态学和免疫学研究表明,早期微循环障碍、细胞凋亡对于重型肝炎的疾病进展至关重要。本研究所前期发现MHV-3引起的小鼠暴发性肝炎模型中,肝枯否细胞向M1极化,且M1上fgl2分子高表达,fgl2敲除后小鼠肝脏炎症减轻,M1极化减弱。本研究旨在前期工作基础上,采用体外细胞模型,深入研究fgl2对巨噬细胞极化的影响及其与重型肝炎疾病进展的关系,为进一步阐明重型肝炎的免疫学发病机制提供依据,为重型肝炎新型治疗途径提供新靶点。方法1.THP-1细胞经PMA+LPS诱导后,流式检测细胞表面CD80以及fgl2,Elisa检测上清中炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)水平,Real-time PCR检测fgl2及M1相关(iNOS、TNF-α、IL-6、IL-1β)的基因表达。2.采用3%淀粉肉汤刺激分离野生型Balb/cJ小鼠以及Fgl2-/-小鼠腹腔巨噬细胞,体外加入MHV-3以模拟小鼠暴发性肝炎体内抗原刺激状态。3.流式细胞术检测MHV-3感染后巨噬细胞M1/M2的比例变化,以及fgl2的变化。4.CBA检测巨噬细胞(WT、fgl2-/-)感染MHV-3后细胞上清中炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1、IL-10、IL-12)的变化。5.Real-time PCR检测巨噬细胞(WT、fgl2-/-)感染MHV-3后fgl2基因表达,M1相关基因(iNOS、TNF-α、IL-6、IL-1β)、M2相关基因(CD206、Arg1、TGF-β)表达差异。结果1.THP-1细胞依次经PMA、LPS诱导后,向M1型极化并伴有fgl2表达升高。实验组与对照组相比,流式检测发现CD80+(M1标记)比例明显升高(79.67±2.11%VS 32.43±2.11%,P<0.001),CD80+的M1中fgl2表达升高(70.8±5.26%VS 36.83±3.47%,P<0.001);Elisa发现上清中炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)的分泌增加;Real-time PCR检测fgl2及M1相关(iNOS、TNF-α、IL-6、IL-1β)的基因表达升高。2.野生型Balb/cJ小鼠腹腔巨噬细胞经MHV-3病毒刺激后,向M1极化并伴有fgl2表达升高。实验组与对照组相比,流式细胞检测发现iNOS+(M1标记)占巨噬细胞标志F4/80+的比例升高,同时伴随fgl2的表达增加;CBA发现炎症因子TNF-α、IL-6、MCP-1升高,而IL-1β、IL-12、IL-10无明显差异;Real-time PCR检测发现fgl2及M1相关(iNOS、TNF-α、IL-6、IL-1β)基因表达升高,而M2相关(CD206、TGF-β)基因表达下降。3.提取野生型和fgl2敲除鼠腹腔巨噬细胞,MHV-3病毒刺激后,均向M1极化,但fgl2敲除鼠M1极化比例下降。相同的病原刺激条件下,fgl2敲除鼠与野生型鼠相比,流式检测发现iNOS+(M1标记)比例降低;CBA结果显示炎症因子(TNF-α、IL-6、MCP-1)表达也下降;Real-time PCR显示M1相关(iNOS、TNF-α、IL-6、IL-1β)基因表达下降,而M2相关(CD206、TGF-β)基因表达升高。结论1.Fgl2可促进巨噬细胞向M1极化,抑制其向M2极化;2.Fgl2与巨噬细胞向M1极化密切相关,但不是其极化所必须存在的分子,可能与其他分子存在协同作用。