目的：白细胞介素15（IL-15）是与白细胞介素2（IL-2）有相似生物学活性，但无序列同源性的新细胞因子，其体内分布远较IL-2广泛，在免疫调节和免疫应答尤其是在抗肿瘤免疫应答中有重要作用。对IL-15的鉴定和研究均需有抗IL-15的抗体。本研究的目的是用细胞工程的方法制备鼠抗人IL-15单克隆抗体（简称单抗），鉴定其生物学和免疫学特性及理化特性，并初步探讨其应用。 方法：自重组人白细胞介素15（rhIL-15）基因工程菌提取融合蛋白GST-IL-15，12%SDS-PAGE电泳鉴定，依据牛血清白蛋白（BSA）的浓度目测选择蛋白量为50μg的凝胶条带切下制备免疫原，免疫BALB/c小鼠5次，第一次与第二次免疫间隔4周，其后每次免疫间隔2周，融合前三天以rhIL-15包涵体蛋白（rhIL-15IBP）攻击。取免疫脾细胞与骨髓瘤细胞株Sp2/0，用50%聚乙二醇（PEG）融合，HAT培养基选择培养出融合细胞。用rhIL-15IBP为抗原，间接ELISA法，初筛分泌抗rhIL-15IBP抗体的融合细胞，有限稀释法克隆化培养获得稳定分泌抗rhIL-15IBP单抗的阳性杂交瘤细胞株，最后以国际市售有生物学活性的rhIL-15蛋白为抗原，间接ELISA法，鉴定阳性细胞株分泌的单<WP=4>抗对功能性rhIL-15蛋白的有效性。以体外连续传30代、反复冻存复苏5次、液氮中冻存3个月后复苏，测定细胞株分泌单抗的稳定性。做杂交瘤细胞的染色体计数并与骨髓瘤细胞系Sp2/0和小鼠骨髓细胞的染色体计数进行比较。制备腹水型、上清型和无血清型单抗。用无血清型单抗作间接ELISA测定单抗的Ig类别。用腹水型单抗做耐热性、耐冻融性实验及 pH值对单抗稳定性影响实验。耐热性实验分为56℃30分钟，37℃保存1-7天和4℃保存7天。耐冻融性实验是腹水型单抗于-20℃冻存后室温自然融化，反复6次后测定效价。测定 pH值对单抗稳定性影响实验，是分别以0.05M pH2.2甘氨酸-盐酸缓冲液, 0.05M pH9.6碳酸盐缓冲液和 0.01M pH7.4磷酸盐缓冲液将腹水型单抗（以正鼠血清作阴性对照）作1：10稀释, 4℃静置24小时、48小时后间接ELISA测定其OD450与阴性对照OD450的比值。竞争ELISA测定单抗与功能性rhIL-15蛋白反应的特异性及与rhIL-2、IL-6的交叉反应性。以rhIL-15IBP免疫新西兰白兔制备抗人IL-15的血清型多克隆抗体（多抗）。以PEG沉淀法纯化腹水型单抗，以饱和硫酸铵沉淀法纯化血清型多抗中的IgG类抗体。用纯化的抗人IL-15的单抗与多抗，建立双抗体夹心间接ELISA，初步应用于检测系列稀释的功能性rhIL-15蛋白，确定检测的敏感性。 结果：自rhIL-15基因工程菌提取GST-IL-15融合蛋白，12%SDS-PAGE鉴定后，切取相应位置的凝胶条带为免疫原成功免疫小鼠。经细胞融合，HAT选择培养，抗体检测筛选，获得3孔产抗rhIL-15IBP抗体的融合细<WP=5>胞，经克隆化培养得到一株稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株，命名为5B11，其分泌的单抗可与国际市售的有生物学活性的rhIL-15蛋白结合。5B11杂交瘤细胞株稳定性较好，体外连续传30代、反复冻存复苏5次、液氮中冻存3个月后复苏测定细胞株仍可稳定分泌单抗。5B11杂交瘤细胞染色体计数为90±4条，而小鼠骨髓细胞为40条，Sp2/0骨髓瘤细胞为64±3条。 5B11分泌的单抗的Ig类别为IgM。腹水型单抗的效价为1：12800，上清型单抗的效价为1：64。腹水型单抗作耐热性和耐冻融性实验结果为56℃30分钟效价下降至1：1600；37℃放置1天效价下降一个稀释度，37℃放置3天又下降一个稀释度，一直到7天效价稳定在1：3200。反复冻融六次效价不变。pH值对单抗稳定性影响的实验结果示，酸性和碱性都可使单抗稳定性下降。单抗与功能性rhIL-15特异性结合，与rhIL-2、IL-6没有交叉反应。获得的抗人IL-15的血清型多抗，效价为1：40万，经50%、33%饱和硫酸铵沉淀后效价为1：10万。以纯化的抗人IL-15的单抗与多抗，建立双抗体夹心间接ELISA，检测功能性rhIL-15蛋白的敏感性达到10ng/ml。 结论：1自rhIL-15基因工程菌提取的融合蛋白GST-IL-15可以代替功能性rhIL-15作为免疫原制备抗人IL-15单抗；2获得了一株稳定分泌抗人IL-15单抗的杂交瘤细胞株5B11，染色体计数90±4条，其分泌的单抗Ig类别为IgM；3用纯化的抗人IL-15单抗和多抗，建立了双抗体夹心间接ELISA的方法, 检测功能性rhIL-15蛋白的敏感性为10ng/ml。