苜蓿皂苷引起溶血机制的探究

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本试验主要从体内和体外两个方面着手探讨苜蓿皂苷(Alfalfa saponin,AS)溶血特性。通过灌胃小白鼠苜蓿皂苷考察摄入皂苷是否会引起溶血,通过体外溶血试验探讨苜蓿皂苷的溶血机制。试验如下:试验一苜蓿皂苷体内溶血试验为了探究摄入皂苷是否会引起血管内溶血,选取180只健康小白鼠,按体重和性别随机分为6个处理,每个处理3个重复,每个重复10只。将0.0125、0.025、0.05、0.1、0.2g/mL皂苷1mL分别灌胃I、II、III、IV、V组小鼠,对照组(CK)灌胃等量的生理盐水(1mL),试验期为30天。试验表明:(1)灌胃苜蓿皂苷后,血常规中红细胞数目和红细胞压积均降低且V组显著低于对照组(P<0.05),平均血红蛋白浓度均高于对照组且试验IV、V与对照组相比差异显著(P<0.05)。(2)试验IV、V组血浆游离血红蛋白含量极显著高于对照组(P<0.01);试验IV组网织红细胞计数%极显著高于对照组和试验I、II组(P<0.01)。(3)随着灌胃剂量的加大红细胞出现轻度大小不等,试验III组部分红细胞中心淡染区消失,细胞着色较深,且形态异常。(4)红细胞渗透脆性最大抵抗值则显著升高(P<0.05)。(5)骨髓造血系统中红系增生活跃,粒红比显著降低(P<0.05)。(6)灌胃AS对实质器官组织结构没有影响。试验二苜蓿皂苷体外溶血试验通过荧光电子显微镜和扫描电镜观察AS对红细胞形态的影响,前者拍摄AS和红细胞的作用过程,后者观察不同浓度对细胞形态影响的程度。采用分光光度法检测AS体外溶血时Na+-K+ATP酶和Ca2+-Mg2+ATP酶活性,设计了与葡萄糖通道、阴离子通道、ATP酶相关的溶液与阻断剂三个方面对AS溶血影响的主要内容。结果显示:镜下AS处理的红细胞变形严重,出现大量球形红细胞和棘形红细胞以及囊泡。溶血时Na+-K+ATP酶和Ca2+-Mg2+ATP酶活性显著下降(P﹤0.01)。AS体外溶血显示,10%的高渗液葡萄糖显著拮抗AS溶血(P﹤0.01);高浓度的葡萄糖通道抑制剂细胞松弛素B和脱氢表雄酮均能显著拮抗AS溶血(P﹤0.01);氯离子盐渗液LiCl和NaCl均显著抑制AS溶血(P﹤0.01),高浓度阻断剂NPPB和DIDIS显著促进AS溶血(P﹤0.01);钠离子盐溶液能不同程度的抑制溶血,高浓度的钾离子盐溶液和Na+-K+ATP酶抑制剂毒毛旋花苷K则显著促进溶血(P﹤0.01);MgSO4.7H2O和CaCl2均能显著抑制AS溶血作用(P﹤0.01),华蟾酥毒基有协同AS溶血的作用,高浓度钙通道抑制剂维拉帕米能显著拮抗AS溶血(P﹤0.01)。以上结果表明AS体外溶血的机制可能是以GLUT1为作用位点,通过改变钠泵、Ca2+-Mg2+ATP酶、阴离子通道转运活性和构象,最终导致胞内渗透压升高,红细胞破裂溶血。在临床应用上,为解除苜蓿皂苷溶血作用提供理论基础。
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