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受体介导的靶向治疗相较于传统的治疗方法而言具有组织选择性更好、毒副作用更小、药物利用率更高的优点。随着分子生物技术及细胞受体分子水平的研究深入,发现当正常组织细胞发生癌变或恶性分化时,其细胞表面会出现一些过度表达或分化的受体,而这种特殊受体就成为正常细胞与肿瘤细胞的区分点,从而可以成为肿瘤治疗的靶点。换言之,受体介导的抗肿瘤靶向系统是以肿瘤细胞表面特异性或过度表达的受体为靶点,以受体对应的配体或配体结合物为载体,利用受体和配体的特异性反应,将药物递送至受体表达阳性的肿瘤细胞的一种治疗系统。本研究拟设计合成的糖肽类双靶向抗肝肿瘤药物载体,这是半乳糖、乙酰半乳糖、乙酰葡萄糖-苯丙氨酸-赖氨酸共价键连接的阿霉素药物载体,以及合成半乳糖、乙酰半乳糖、乙酰葡萄糖-苯丙氨酸-赖氨酸共价键连接的罗丹明探针;利用液相固相肽类合成法以及点击化学反应合成目标化合物并进行核磁共振氢谱、碳谱及质谱表征。本课题做了如下几项工作(1)合成了 ASGPR配体链接叠氮化合物:Galactose-N3、Galactosamine-N3、Glucosamne-N3;(2)合成了 ASGPR的探针:Gal1-Rho、GalN1-Rho、GluN1-Rho,Gal3-Rho、Ga1N3-Rho、GluN3-Rho,Gal4-Rho、GalN4-Rho、GluN4-Rho;(3)合成了 ASGPR 介导的抗肝肿瘤药物载体:Gal1-Dox、GalN1-Dox、GluN1-Dox;设计合成四触角-MC-Phe-Lys(NH2)-PABC-Dox(Gal4-Dox、GalN4-Dox、GluN4-Dox),目前为止完成到前期合成MC-Phe-Lys(Mtt)-PABC-Dox,三触角阿霉素与四触角阿霉素合成方法类似;(4)利用Hep2的细胞实验探讨研究了 ASGPR的探针(Gal1-Rho、GalN1-Rho、GluN1-Rho,Gal3-Rho、GalN3-Rho、GluN3-Rho,Gal4-Rho、GalN4-Rho、GluN4-Rho);(5)性能研究:利用高效液相色谱测试在37℃下组织蛋白酶B酶解一触角-Phe-Lys(NH2)-PABC-Dox在30min和1h的酶解实验情况,探讨研究了 ASGPR介导的抗肝肿瘤药物载体(Gal1-Dox、GalN1-Dox、GluN1-Dox)的HepG2细胞毒性实验。1、高效液相色谱结果表明一触角-Phe-Lys(NH2)-PABC-Dox(Gal1-Dox、GalN1-Dox、Glu1-Dox)在30分钟内完全被组织蛋白酶B酶解并释放出阿霉素;利用HepG2细胞核进行细胞毒性实验结果表明针对HepG2细胞当一触角阿霉素浓度大于Ic50-=1μ M,HepG2细胞明显被毒杀;证明本课题设计合成的化合物具有实际可行性。2、研究探讨了配体种类以及数量(配体距离已设计好)与HepG2细胞结合力的关系即与ASGPR的结合力的关系。(1)Gal1-Rho、GalN1-Rho、GluN1-Rho与HepG2细胞结合力实验结果表明GluN1-Rho>GalN1-Rho>Gal1-Rho即表明配体种类与ASGPR的结合能力是乙酰葡萄糖>乙酰半乳糖>半乳糖;(2)Gal1-Rho、Gal3-Rho、Gal4-Rho与HepG2细胞结合力实验表明Gal4-Rho>Gal3-Rho>Gal1-Rho即表明与ASGPR的结合能力与数量的关系是四触角>三触角>一触角;(3)GalN1-Rho、GalN3-Rho、GalN4-Rho 与 HepG2 细胞结合力实验表明GalN3-Rho>GalN4-Rho>GalN1-Rho即表明与ASGPR的结合能力与数量的关系是三触角>四触角>一触角;(4)GluN1-Rho、GluN3-Rho、GluN4-Rho 与 HepG2 细胞结合力实验表明 GluN3-Rho>GluN4-Rho>GluN1-Rho即表明与ASGPR的结合能力与数量的关系是三触角>四触角>一触角;(5)乙酰半乳糖、乙酰葡萄糖罗丹明探针实验结果与半乳糖罗丹明探针实验结果比较,可能是乙酰基影响与ASGPR结合能力,但仍然表现与ASGPR结合能力与数量关系是多触角(三、四)>单触角。3、综上高效液相色谱检测组织蛋白酶B酶解一触角-Phe-Lys(NH2)-PABC-Dox实验、一触角阿霉素与HepG2细胞的毒性实验和ASGPR探针与HepG2细胞实验结果:(1)本实验具有实际研究的价值意义,可以继续后期实验;(2)研究探讨出配体的种类和数量(距离已设计好)决定与ASGPR的结合力强弱,乙酰葡萄糖配体、半乳糖四触角、乙酰半乳糖三触角和乙酰葡萄糖三触角表现出与ASGPR更强的结合力,猜测是乙酰基影响与ASGPR结合能力;(3)因半乳糖的四触角、乙酰半乳糖三触角和乙酰葡萄糖三触角键接罗丹明的探针与HepG2细胞结合力实验表明与ASGPR更强的结合力,所以还需合成Gal4(/GalN3/GluN3)-Dox,并探讨研究进行对癌细胞毒性实验。