蒙药材阿格希日嘎生物活性研究

来源 :内蒙古医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:shizijiazuren
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目的研究蒙药材阿格希日嘎(藜芦)的抗炎活性及抗肿瘤活性,并考察其发挥抗炎作用的机制。通过对其单体化合物的抗炎活性与作用机制、及其抗肿瘤活性进行研究,寻找阿格希日嘎中新的生物活性化合物,为蒙药新型药物的研制提供参考。方法与结果(1)抗炎活性检测:对LPS诱导RAW 264.7巨噬细胞增殖的影响:采用CCK8法检测药物是否具有细胞毒性,结果表明给药浓度在0-200μmol/L的范围内时,对RAW264.7细胞没有毒性。采用Griess法检测药物对细胞培养上清液中NO水平的影响,结果表明除桑辛素A(5)、3,4-二甲氧基-苯甲酸甲酯(9)外,其余成分对NO的产生均有显著抑制作用。采用ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6炎症细胞因子水平的变化,结果表明化合物6-羟基-3’,5’,7-三甲氧基-2-芳基苯并呋喃(1)、4,6-二甲氧基-3’-羟基-2-芳基苯并呋喃-5’-O-β-D-葡萄糖(2)、6-羟基-3’,5’-二甲氧基-2-芳基苯并呋喃-4-O-β-D-葡萄糖(3)、桑辛素M(4)、反式香豆酸甲酯(6)、(E)-阿魏酸甲酯(7)、4-甲基-β-D-葡萄糖苷(8)、氧化白藜芦醇(11)可显著下调部分细胞因子的水平。(2)抗炎作用机制研究:采用Real-time PCR法检测检测单体化合物6-羟基-3’,5’,7-三甲氧基-2-芳基苯并呋喃(1)、反式香豆酸甲酯(6)、氧化白藜芦醇(11)刺激巨噬细胞后相关基因iNOS、TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA变化,结果表明6-羟基-3’,5’,7-三甲氧基-2-芳基苯并呋喃(1)可显著抑制iNOS和TNF-αmRNA的表达;反式香豆酸甲酯(6)可显著抑制IL-1βmRNA的表达;氧化白藜芦醇(11)可显著抑制iNOS、TNF-α和IL-6 mRNA的表达。采用Western blot法检测单体化合物6-羟基-3’,5’,7-三甲氧基-2-芳基苯并呋喃(1)、反式香豆酸甲酯(6)、氧化白藜芦醇(11)刺激巨噬细胞后NF-κB及MAPK信号通路上相关蛋白P65、phospho-ERK(1/2)和ERK(1/2)表达的变化。结果表明6-羟基-3’,5’,7-三甲氧基-2-芳基苯并呋喃(1)可显著抑制P65和phospho-ERK(1/2)的表达;反式香豆酸甲酯(6)可显著抑制P65和ERK(1/2)的表达;氧化白藜芦醇(11)可显著抑制P65、phospho-ERK(1/2)和ERK(1/2)的表达。(3)抗肿瘤活性检测:采用CCK-8细胞染色法检测从阿格希日嘎中分离得到的9个单体化合物对对5种常见的癌细胞系(人肺癌细胞系A549、人结直肠腺癌细胞系HCT-15、人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y、人乳腺癌细胞系MDA-MB-231、人肝癌细胞系HepG2)的生长抑制作用。其中氯仿层、乙酸乙酯层及单体成分6-羟基-3’,5’,7-三甲氧基-2-芳基苯并呋喃(1)、桑辛素M(4)、桑辛素A(5)对部分肿瘤细胞系有中等至显著的抑制作用,IC50值在30-200μM之间,其余馏分及单体成分对五种癌细胞系均无明显抑制作用,IC值>200μM。结论对阿格希日嘎各单体化合物进行体外抗炎及抗肿瘤活性的筛选,抗炎活性及机制研究结果表明6-羟基-3’,5’,7-三甲氧基-2-芳基苯并呋喃(1)、反式香豆酸甲酯(6)和氧化白藜芦醇(11)具有显著的抗炎活性,并通过NF-κB及MAPK信号通路发挥抑制作用。抗肿瘤活性研究结果表明氯仿层、乙酸乙酯层及单体成分6-羟基-3’,5’,7-三甲氧基-2-芳基苯并呋喃(1)、桑辛素M(4)、桑辛素A(5)对部分肿瘤细胞系有中等至显著的抗肿瘤活性。
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