目前,癌症已经成为威胁人类健康最重要的疾病之一,并且癌症发病率呈逐年上升的趋势。近几年,基因治疗作为治疗癌症和遗传疾病的一种有前途的方法引起了人们广泛地关注。基因治疗要求更高效率、无毒的基因递送系统,研究表明siRNA纳米制剂领域已经取得了重大进展,但是重要的问题是获得能够成功递送siRNA的无毒有效的载体。葡聚糖被广泛用作药物输送中的载体,还可用作细胞三维培养支架,葡聚糖中的大量羟基可以有效地连接其他功能分子。目前葡聚糖衍生物系统尚处于研究阶段,本文主要研究葡聚糖-多肽载体对于二维和三维生长细胞的转染效率及细胞毒性。首先,研究DEX-Peptides载体复合DNA的能力及载体是否能转染DNA。合成六种载DEX-MA/VS-Peptides(多肽分别为R3H7C,R3H8C,R2H7C),在不同N/P(0.5,1,2,3,4,5,10)条件下制备复合物Dex-Peptides/GFP-March5,通过琼脂糖凝胶电泳实验确定复合物完全包裹时的N/P;检测复合物在不同N/P的粒径电位,发现随着N/P的增加,复合物粒径逐渐变小,表面电荷逐渐增大,载体能向细胞内转染质粒。然后,研究DEX-Peptides载体复合SiRNA的能力及载体是否能转染SiRNA。在不同N/P(0.5,1,2,3,4,5,10)条件下制备复合物Dex-Peptides/SiRNA NC,通过琼脂糖凝胶电泳实验和检测复合物在不同N/P的粒径和电位,证明载体能够复合SiRNA,并且能向细胞内转染SiRNA。随后,研究DEX-Peptides载体对细胞的转染效率及毒性。用六种载体分别对Hela细胞进行外源过表达March5,通过实时定量PCR实验和Western Blot实验证明载体MA-R3H7,MA-R3H8,DVS-R3H7,DVS-R3H8转染质粒的效率较高;用六种载体向Hela细胞转染SiRNApcsk9,分析pcsk9基因下调水平,证明载体MA-R2H7,DVS-R2H7对SiRNA的转染效率较高;通过MTT实验证明载体DEX-peptides对细胞的毒性较低,细胞存活率达80%以上,而转染试剂PEI对细胞的毒性较大,细胞存活率仅为65%左右。最后,针对DEX-MA-HA水凝胶培养的细胞,研究载体是否能向三维培养的细胞转染质粒。通过hoechst染核和小鼠模型试验证明水凝胶性能良好,能够真实的模拟体内肿瘤细胞周围三维生长环境,细胞呈球体形状生长,荧光显微镜成像表明DEX-VS-R3H7载体能向细胞内转染质粒。本实验研究促进葡聚糖聚合阳离子载体的研究进展,为基因治疗提供了有效的基因递送系统。