鹌鹑α、γ干扰素克隆、原核表达及抗病毒活性分析

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鹌鹑是我国重要的经济动物,养殖量位居世界首位,然而某些烈性传染病如新城疫、禽流感等严重威胁着鹌鹑养殖业的发展。干扰素可以干扰病毒粒子复制,保护细胞不受病毒感染,具有良好的抗病毒、免疫调节功能,是理想的抗病毒生物制剂。本研究利用PCR技术从鹌鹑全基因组克隆IFN-a基因片段,并从刀豆素A诱导培养的鹌鹑外周血淋巴细胞中提取RNA,利用RT-PCR技术得到鹌鹑IFN-γ cDNA, PCR扩增IFN-γ基因片段。分别构建pEASY-Bblunt-coIFN-α、pEASY-Blunt-coIFN-γ克隆载体,测序表明coIFN-α开放阅读框大小为594 bp,编码197 aa; coIFN-y开放阅读框大小为495 bp,编码164 aa。构建重组表达载体pET-32a-coIFN-α、pET-32a-coIFN-γ,并在大肠杆菌系统中诱导表达。丙烯酰胺凝胶电泳结果表明coIFN-α和coIFN-γ重组蛋白大小约为43.0 kDa和40.0 kDa,均存在于包涵体中。将coIFN-α和coIFN-γ重组蛋白纯化、复性,利用纯化蛋白制备兔抗coIFN-α、coIFN-γ多克隆抗体。用复性后的coIFN-α和coIFN-γ重组蛋白孵育鸡胚成纤维细胞,分别接种新城疫、禽流感、水泡性口炎病毒,检测coIFN-α、coIFN-γ重组蛋白抗病毒活性。结果表明:coIFN-α、coIFN-γ抗病毒生物活性最高达到104 U/mg、103-104 U/mg级别。coIFN-α、coIFN-γ重组蛋白被兔抗coIFN-α、coIFN-γ多克隆抗体中和后不再具备抗病毒活性,证明coIFN-α和coIFN-γ重组蛋白对新城疫、禽流感、水泡性口炎病毒具有抑制作用。通过本试验得到鹌鹑IFN-α和IFN-γ基因,原核表达鹌鹑IFN-α和IFN-γ分子蛋白,并对其抗病毒活性、理化性质做了初步研究。为进一步研究鹌鹑IFN-α和IFN-γ的生物学特性提供了物质材料,并为鹌鹑养殖业抗病毒生物制剂的研发提供理论基础。
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