【摘 要】
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目的:冠状动脉粥样硬化性心脏病（coronary artery disease,CAD）患者心外膜脂肪组织（epicardial adipose tissue,EAT）中存在大量的炎症因子和巨噬细胞,其中巨噬细胞以促炎的M1型为主,CAD患者EAT中炎症因子的聚集受到多种原因的影响,但具体调控机制有待进一步研究。本研究通过检测CAD EAT中KLF7的表达及培养THP-1巨噬细胞的基础上,探讨KL
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目的:冠状动脉粥样硬化性心脏病（coronary artery disease,CAD）患者心外膜脂肪组织（epicardial adipose tissue,EAT）中存在大量的炎症因子和巨噬细胞,其中巨噬细胞以促炎的M1型为主,CAD患者EAT中炎症因子的聚集受到多种原因的影响,但具体调控机制有待进一步研究。本研究通过检测CAD EAT中KLF7的表达及培养THP-1巨噬细胞的基础上,探讨KLF7调控THP-1巨噬细胞炎症应答的机制,阐明KLF7在CAD发生发展过程中的作用机制。方法:（1）选取CAD及非冠心病（non-CAD）组患者各30名,收集EAT组织样本及患者临床一般临床资料、生化指标。实时荧光定量PCR（q RT-PCR）和Western blot检测EAT中KLF7、CD68、IL-6、TNF-α、JNK和NF-κB（p65）的表达水平;（2）体外培养THP-1细胞,将THP-1细胞诱导分化为THP-1巨噬细胞,用不同的KLF7干扰片段刺激THP-1巨噬细胞,通过q RT-PCR和Western blot检测细胞中KLF7的表达量;（3）用不同浓度LPS在同一时间段及相同浓度LPS在不同时间段刺激THP-1巨噬细胞,q RT-PCR和Western blot检测细胞中KLF7的表达量;应用细胞转染技术,沉默KLF7在THP-1巨噬细胞内的表达,q RT-PCR和Western blot检测细胞中MAPKs和NF-κB炎症信号通路重要因子的表达水平。结果:1.人体组织实验（1）一般资料及生化指标两组年龄、BMI、SBP、DBP、LDL、HDL、TC和TG等差异无统计学意义（P>0.05）,但超敏C反应蛋白CAD组较non-CAD组升高,脂联素（APN）降低（P<0.05）。（2）受试个体EAT中KLF7和炎症信号通路关键因子mRNA及蛋白表达水平我们检测KLF7在CAD和non-CAD组EAT中的表达发现,与non-CAD组相比,CAD患者EAT中KLF7的mRNA及蛋白表达均升高（P<0.001）;TLR4、IL-6、TNF-α、JNK、NF-κB的mRNA也显著高于non-CAD组（P<0.0001）。（3）KLF7表达与炎症信号通路关键因子表达相关性分析CAD组EAT中KLF7的mRNA表达水平与TLR4、IL-6、TNF-α、JNK、NF-κB显著正相关（P<0.05）。（4）受试个体EAT中CD68表达水平和TLR4、IL-6、TNF-α表达相关性分析CAD患者EAT中CD68的mRNA水平高于non-CAD组（P<0.0001）。CD68mRNA表达在CAD患者EAT中与TLR4,IL-6和TNF-α呈正相关（P<0.01）。2.体外细胞实验（1）不同KLF7干扰片段在THP-1巨噬细胞中的表达与NC组相比,si-KLF7-1和si-KLF7-2的mRNA和蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,但si-KLF7-2的效率优于si-KLF7-1。（2）LPS刺激THP-1巨噬细胞后KLF7的表达在相同时间内,用不同浓度的LPS刺激THP-1巨噬细胞,与LPS浓度为0 ng/ml相比,KLF7的mRNA和蛋白的表达水平随LPS浓度的增加而增加,在100 ng/ml时显著升高（P<0.01）。LPS浓度为100ng/ml时,在不同时间点刺激THP-1巨噬细胞,与0 min相比,KLF7的mRNA和蛋白的表达水平随LPS刺激时间的增加而增加,在6h时显著升高（P<0.05）。（3）KLF7通过JNK的磷酸化促进LPS诱导的MAPKs和NF-κB炎症信号通路的激活THP-1巨噬细胞转染si-KLF7-2后,再用LPS刺激细胞,细胞内的p-P38、p-ERK1/2的蛋白表达水平无显著改变,但p-JNK、p-P65、p-IκBα和核内P65蛋白表达水平显著低于si-NC组（P<0.05）。结论:（1）CAD患者EAT中KLF7表达增加。（2）KLF7通过调控NF-κB炎症信号通路来介导EAT中炎症因子的释放。
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