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前言:
树突状细胞(DendriticCell)是目前发现的专职抗原提呈细(Antigen Presenting Cell,APC),它可以特异捕捉抗原,表达高水平的细胞内主要组织相容抗原MHC-Ⅱ类分子和协同刺激分子CD80和CD86,并能移行至淋巴器官,刺激初始型T细胞增殖活化,同时刺激B淋巴细胞增殖成熟,并刺激Th细胞及NK细胞活性。未成熟DC在机体的外周组织中捕获和加工抗原,然后开始向淋巴器官转移,并渐进式成熟,与此同时DC表面重要的功能分子,如:MHC-Ⅱ、CD40和CD80的表达增加。DC参与机体的抗感染免疫及肿瘤免疫应答的过程,在肿瘤免疫治疗研究中,肿瘤细胞与DC融合得到细胞融合疫苗的方案很受重视。蛋氨酸脑啡肽(MethionieEnkePhalin,MENK),是从猪脑提取液中分离出的具有内源性吗啡样活性的物质,MENK通过与免疫细胞上受体结合发挥免疫调节作用,对自然杀伤细胞、单核细胞和细胞因子的释放都有调节作用。那么MENK对DC瘤苗是否也有影响,国内外未见报道。本研究就MENK对小鼠髓系DC2.4细胞株与同种鼠源的淋巴瘤细胞融合成的DC瘤苗的功能进行探讨。
方法:
采用本教研室保存并传代的C57/BL-6小鼠髓系DC2.4细胞株及同源的淋巴瘤细胞进行实验,复苏培养细胞,应用扫描电镜技术、酸性磷酸酶活性检测、流式细胞仪检测技术、酶联免疫吸附试验、MTS方法等检测DC表型和功能的各种指标。长的突起;而未作处理的DC(即RPMI1640组)的突起很短甚至没有突起。
2、MENK处理的DC瘤苗细胞中的酸性磷酸酶活性低于RPMI1640组(P＜0.05)。
3、MENK处理DC瘤苗,能够上调DC表面MHC-Ⅱ、CD86分子的表达。
4、MENK处理的DC瘤苗比未做任何处理的对照组(即RPMI1640组)IL-12分泌的量增加。(P＜0.05)
5、MENK处理的DC瘤苗,与适宜比例的淋巴细胞培养,可促进淋巴细胞的增殖。
6、MENK处理的DC瘤苗对Rac-1淋巴瘤细胞的特异性杀伤能力比各处理组均增强。
结论:
1、适宜浓度的蛋氨酸脑啡肽显著促进负载Rac-1淋巴瘤抗原的DC2.4形态学的成熟。
2、适宜浓度的蛋氨酸脑啡肽作用负载Rac-1淋巴瘤抗原的DC2.4,使DC2.4细胞内的酸性磷酸酶活性下降,表明DC吞噬抗原能力下降,递呈能力增加,趋向成熟。
3、适宜浓度的蛋氨酸脑啡肽显著增加负载Rac-1淋巴瘤抗原的DC2.4的MHC-Ⅱ类分子和CD86分子的表达,刺激DC发育成熟。
4、适宜浓度的蛋氨酸脑啡肽显著增加负载Rac-1淋巴瘤抗原的DC2.4培养上清中IL-12的含量,说明MENK促进DC2.4成熟的同时,上调DC2.4的功能。
5、适宜浓度的蛋氨酸脑啡肽作用负载Rac-1淋巴瘤抗原的DC2.4,使DC2.4显著促进淋巴细胞增殖,上调DC2.4的功能。
6、适宜浓度的蛋氨酸脑啡肽作用于负载Rac-1淋巴瘤抗原的DC2.4,可显著增强DC2.4诱导活化淋巴细胞对Rac-l淋巴瘤细胞的特异性杀伤活性。