抗生素滥用导致细菌和真菌耐药性成为不可忽视的问题。抗菌肽由于其独特作用机制,细菌和真菌不易对其产生耐药性,具有开发成新型抗生素的潜力。但是天然抗菌肽往往存在活性不高、提取过程复杂等不足,限制了抗菌肽的开发应用。人工设计多肽是获取新型抗菌肽的一种有效途径。本研究从实验室开发的抗菌肽库设计软件V1.0设计获得的肽库中随机挑选100条多肽序列,进行固相合成。通过抑菌实验测试了100条多肽的抗菌活性,从中筛选出一条广谱高抑菌活性的抗菌肽,将其命名为SAMP1。对抗菌肽SAMP1进行结构优化,筛选到更加高效低毒的抗菌肽SAMP1-A3和SAMP1-A4。抑菌实验结果显示,抗菌肽SAMP1-A3和SAMP1-A4对热带念珠菌的最小抑菌浓度均为3.9μg·mL^-1,对单增李斯特菌的最小抑菌浓度分别是3.9μg·mL^-1和0.95μg·mL^-1。溶血实验结果显示,当SAMP1-A3和SAMP1-A4浓度为62.5μg·mL^-1时,引起溶血率分别为0%和2.7%。细胞毒性实验结果显示,当SAMP1-A3和SAMP1-A4在40×MIC浓度下处理24h后,并未造成HUVEC细胞死亡。浓度在125μg·mL^-1以下时,SKOV3细胞生长不受影响,说明抗菌肽SAMP1-A3和SAMP1-A4对哺乳动物细胞没有毒性。因此,SAMP1-A3和SAMP1-A4是抗菌活性强、生物安全性高的抗菌肽。稳定性实验结果表明:SAMP1-A3和SAMP1-A4在80℃下加热30min抑菌活性不变,在pH2.0⁸.0范围内处理1h后活性不变,25%血浆处理6h后抑菌活性不变,但对胰蛋白酶敏感。圆二色谱结果显示,在50%体积分数的TFE溶液中,SAMP1-A3和SAMP1-A4的α-螺旋比例增加。利用扫描电镜、透射电镜和流式细胞术实验研究抗菌肽SAMP1-A3和SAMP1-A4的作用机制。发现抗菌肽SAMP1-A3和SAMP1-A4引起热带念珠菌和单增李斯特菌细胞膜破裂,内容物泄露致使病原菌死亡;抗菌肽SAMP1-A4可以破坏单增李斯特菌细胞器结构,细胞膜形成损伤。综上所述,本研究获得了到两条高效低毒且具有较高稳定性的抗菌肽SAMP1-A3和SAMP1-A4,并证明其通过破坏病原菌细胞膜完整性而发挥抗菌作用。