【摘 要】
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该论文在宿主菌的筛选,培养基、培养条件优化等方面进行了较系统的研究.特别是利用重组大肠杆菌DH5 α/pBV220,采用全合成培养基,在FMG-5L罐上通过创新性的两次升温诱导发酵
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该论文在宿主菌的筛选,培养基、培养条件优化等方面进行了较系统的研究.特别是利用重组大肠杆菌DH5 α/pBV220,采用全合成培养基,在FMG-5L罐上通过创新性的两次升温诱导发酵方法,实现了高密度、高表达人载脂蛋白ApoA-I<,Milano>.最终使得细胞培养密度(OD<,600>)达150,表达水平4.8g.L-1,为文献报道之最.在理论上研究了菌体生长、基质消耗、产物生成等的发酵动力学.并得出发酵生长阶段控制最适合菌体生长的比生长速率(μ)为0.20h<-1>左右;诱导阶段控制最适合目的蛋白表达的比生长速率(μ)为0.16h<-l>左右的结论.从而为进一步的发酵放大提供了理论指导.通过重组菌生长阶段的代谢通量分析解释在以葡萄糖为唯一碳源的基础培养基中,生长阶段控制合适比生长速率为0.20h<-1>的细胞代谢水平上的合理性;通过诱导前后代谢流通量的对比分析表明,第一次诱导后总的ATP生成速率比诱导前高17.67％,而合成途径如氨基酸生成途径通量则明显减少.第二次诱导总的ATP生成速率与第一次诱导相比降低了23.73％,而合成途径如氨基酸生成途径通量则明显增加.由此说明发酵过程两次诱导都是由于能量流的迁移导致物质流的迁移,二次诱导比一次诱导更利于目的蛋白的合成.从而为进一步的高密度、高表达发酵过程调控提供理论依据.
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