目的:　　铜绿假单胞菌（PA）是常见的多重耐药菌株，极强的生物被膜（BF）产生能力是其主要的耐药原因之一。研究显示 D-氨基酸能抑制多种细菌BF的形成，但其具体机制仍有待阐明。本实验从 D-氨基酸对 PAO1群体感应（QS）系统和毒力因子两方面的影响来探索D-氨基酸对 PA BF形成的抑制作用及其机制。　　方法:　　以 PAO1为研究对象，用结晶紫染色法半定量测定BF总量，从D-色氨酸（D-Trp）、D-酪氨酸、D-蛋氨酸、D-亮氨酸中筛选出抑制早期 BF生长效果最好的 D-Trp。分别用氯仿-盐酸萃取法，刚果红-弹性蛋白酶法，苔黑酚-浓硫酸法检测D-Trp对 PAO1产绿脓菌素、弹性蛋白酶、鼠李糖脂这三种毒力的影响。用实时荧光定量PCR法检测 D-Trp对 lasI、lasR、rhlI、rhlR、phzA、lasB、rhlA基因 mRNA表达量的影响。收集临床 PA，结晶紫染色测定 BF的形成能力，并分析多重耐药的PA（MDR-PA）与BF形成能力的关系。D-Trp联合阿米卡星、亚胺培南、头孢他啶，测定D-Trp联合前后抗生素对 BF形成能力“++”的临床 PA MIC的影响，验证 D-Trp是否能降低细菌耐药性。　　结果:　　（1）研究的4种D-氨基酸中，D-Trp对PAO1 BF形成早期的细菌粘附有最明显的抑制作用。D-Trp浓度为10 mM时，与对照组相比细菌的粘附率降低67.58%（P<0.05）。选取 D-Trp进行后续实验。　　（2）D-Trp浓度为5和10 mM时，PAO1产绿脓菌素的含量分别减少15.58%和58.80%；D-Trp浓度为1、5和10 mM时，PAO1产弹性蛋白酶的含量分别减少9.08%、20.93%和23.32%（P<0.05）。D-Trp对 PAO1产鼠李糖脂的含量无明显影响（P>0.05）。　　（3）实时荧光定量 PCR法检测发现不同浓度的 D-Trp对 PA QS系统中4个主要调控基因 lasI、lasR、rhlI、rhlR及绿脓菌素编码基因 phzA、弹性蛋白酶编码基因 lasB、鼠李糖脂编码基因 rhlA的 mRNA表达均有一定的抑制作用（P<0.05）。　　（4）共收集临床 PA152株，结晶紫染色测定临床 PA BF的形成能力，发现 BF阳性菌中 MDR菌比 BF阴性菌多（P<0.05），BF阳性“++”的菌中MDR菌比阳性“+”的菌多（P<0.05）。D-Trp联合临床抗生素阿米卡星、亚胺培南、头孢他啶，针对14株 BF“++”的 PA， D-Trp分别能降低3、5、5株的MIC。　　结论:　　D-Trp可有效降低PAO1 BF形成早期细菌的粘附，可能的机制是D-Trp通过下调QS系统相关基因 mRNA的表达，降低绿脓菌素、弹性蛋白酶的产生，从而抑制早期 BF形成。临床菌株的研究进一步验证BF的产生是细菌重要的耐药机制之一，且D-Trp能一定程度上降低 PA的耐药性。本实验为D-Trp日后开发作为降低PA毒性及耐药性的抗菌辅剂奠定了一定的基础。