还原型谷胱甘肽(GSH)是一种生物活性三肽化合物，广泛分布于动植物细胞和微生物中，作为重要的抗氧化剂，具有多种生理功能。目前，国内采用发酵法生产谷胱甘肽的瓶颈主要在于发酵水平低下，后续提纯工艺收率低，产品纯度低、质量差、成本高，远达不到医药级GSH的质量要求。本论文在详细调研的基础上，探索采用多种分离纯化技术对GSH发酵液进行处理，以分离纯化GSH。本文采用有机溶剂沉淀法对谷胱甘肽发酵液进行了初步纯化。考察了不同有机溶剂种类、有机溶剂用量、溶液pH值、温度和谷胱甘肽初始浓度等对实验结果的影响，通过分析比较不同实验条件下有机溶剂除杂效果及其对谷胱甘肽损失率的情况，对最佳实验工艺进行了确定。在上述实验基础上，本文利用大孔吸附树脂A对谷胱甘肽发酵抽提液进行了进一步纯化。通过绘制静态吸附平衡曲线，确定了大孔吸附树脂A吸附谷胱甘肽的平衡时间；通过考察不同pH值下的吸附情况，选择了最佳上柱pH值；采用动态实验的方法，确定了洗脱条件如洗脱剂种类、洗脱剂浓度及洗脱剂流速等，并对其工艺过程进行了验证。最后，采用制备色谱法对上述谷胱甘肽粗品进行了精制。通过实验选择适当的制备体系，并采用正交实验的方法对其工艺条件进行了优化。在最佳实验条件下，谷胱甘肽的纯度可达90%以上。本文可为还原型谷胱甘肽的分离纯化过程提供有益参考。