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大肠杆菌yigP基因长606bp,位于与CoQ生物合成相关的ubiE和ubiB两个基因之间,属于同一操纵子,其编码产物的功能尚不清楚。经前期研究表明,yigP基因是大肠杆菌正常生长所必需,且其有功能的最小片段yigP-P4P2只有367bp,位于基因下游。
本课题旨在确定yigP-P4P2片段是否存在自身启动子和是否编码蛋白质。首先将yigP-P4P2片段克隆于无启动子的载体pUC-NP上,通过对yigP基因缺陷株JDP14的功能回补实验发现,yigP-P4P2片段内部可能含有完整的转录单元。其次利用启动子探针质粒pSP-Z检测到该片段有启动子活性,且启动子方向与操纵子方向一致。再次通过步移法对yigP-P4P2片段逐步进行缩短,从而确定内部启动子区域为P40V4。最后对启动子下游可能的ORF进行移码突变得到yigP-P4P2-YM片段,通过缺陷株回补实验发现该片段能够替代yigP的功能,最终证明yigP并非蛋白质编码基因。