2010版《中国药典》中人用狂犬病疫苗中的蛋白含量标准提高，要求纯化后未加稳定剂的病毒液中总蛋白含量不高于80μg/剂，牛血清蛋白残留应不高于50ng/剂，成品中宿主细胞蛋白残留不高于24μg/剂，提高纯化分离效果则是生物药企要攻克的问题之一。长期以来在层析系统应用的摸索实验中显示，凝胶层析（Speharose4Fast Flow，4FF）对宿主蛋白和牛血清蛋白分离效果较好，工作条件温和，但实际生产应用中由于样品杂质含量高，容易将层析柱进液口及凝胶孔径堵塞，延长分离时间而影响分离效果；离子交换层析(Core700)，分辨率高，胶体积小，清洗方便，上样量大，分离时间短，在生物医药等领域得到广泛应用。本次实验将凝胶层析与离子交换层析按照core700-core700-4FF，Core700-4FF-4FF，Core700-4FF-Core700三种不同顺序组合使用，对实验样品进行纯化分离。本实验分为两部分：第一部分，选取3批实验样品，每批样品均按上述三种组合方法进行纯化分离，根据纯化后的总蛋白含量，宿主蛋白含量，牛血清蛋白含量，抗原含量，确定能达到药典标准的组合方式。经实验1得到，两种层析柱以Core700-4FF-4FF的组合方式使用时，分离效果较优于其他两种组合方式。第二部分，根据实验1的结果，将另外3批实验样品按照Core700-4FF-4FF的组合方法进行验证实验，检测最后纯化液的总蛋白含量、宿主蛋白含量、牛血清蛋白含量、抗原含量。通过两部分实验，两种层析柱以Core700-4FF-4FF的组合方式使用时，纯化后的检测结果符合2010版药典的要求，可以作为建立纯化工艺的参考，也可作为各相关技术人员操作及实验参考。层析系统在疫苗纯化中的应用研究一直是个备受关注课题，上样体积、上样速度、上样浓度和抗原收集起止点的选择，都是影响疫苗纯化效果的因素，而凝胶层析柱与离子交换层析柱的组合方式更好地发挥了两种层析柱的特点，优化了疫苗的纯化效果，生物药企可根据生产情况，合理灵活使用两种层析柱，保证疫苗质量，提高纯化效率，增加企业的经济效益。