【摘 要】
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目的:乙型肝炎病毒（HBV）感染肝细胞后,病毒基因组中的X基因编码的X蛋白（HBx）在肝细胞胞质中大量积累,并与肝细胞恶性转化密切相关。转录调控因子GATA4在胞质中合成后转入细胞核,具有调控细胞重编程和诱导细胞分化的功能,其功能失活可促进肝癌的发生。Wnt/beta-catenin传导通路是入核传导通路,激活后加速肝癌细胞恶化。前期研究发现,在表达GATA4的肝癌细胞中,HBV感染积累的HBx蛋
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目的:乙型肝炎病毒（HBV）感染肝细胞后,病毒基因组中的X基因编码的X蛋白（HBx）在肝细胞胞质中大量积累,并与肝细胞恶性转化密切相关。转录调控因子GATA4在胞质中合成后转入细胞核,具有调控细胞重编程和诱导细胞分化的功能,其功能失活可促进肝癌的发生。Wnt/beta-catenin传导通路是入核传导通路,激活后加速肝癌细胞恶化。前期研究发现,在表达GATA4的肝癌细胞中,HBV感染积累的HBx蛋白可调控GATA4由胞质进入胞核的过程,整个过程伴随wnt/beta-catenin高表达,而HBx蛋白是否通过wnt/beta-catenin调控GATA4入核,目前未知。由此提出假设:HBx蛋白可激活wnt/beta-catenin通路调控GATA4入核,进而促进肝癌进展。方法:（1）构建由慢病毒介导的HBx的过表达载体CMV-HBx;（2）RT-PCR检测HBx、wnt/beta-catenin、GATA4的m RNA表达;（3）western blot检测HBx、wnt/beta-catenin、GATA4的蛋白质表达;（4）免疫荧光检测HBx、wnt/beta-catenin、GATA4的表达位置的变化;（5）通过添加beta-catenin拮抗剂PRI-724特异性抑制beta-catenin活性。结果:成功构建由慢病毒表达载体CMV-HBx介导的HBx稳定细胞表达株HLE-HBx。RT-PCR和western blot结果显示,HBx在HLE-HBx细胞中成功表达,wnt/beta-catenin含量升高,GATA4总含量降低;激光共聚焦观察显示过表达HBx的HLE中,GATA4入核量减少,胞浆内含量升高;CO-IP实验提示GATA4可能与beta-catenin存在蛋白相互作用。结论:人肝癌细胞系HLE中表达的HBx通过激活wnt/beta-catenin信号通路抑制GATA4总量的表达,激活的beta-catenin与GATA4存在结合,抑制GATA4的入核,导致GATA4功能失活,从而促进肝细胞恶性转化。
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