猪细小病毒病和猪伪狂犬病是危害养猪业发展的两大疫病，给养猪业造成巨大的经济损失。目前，由于常规的免疫学检测方法耗时长、准确性低，普通PCR方法易出现假阳性结果等原因，急需建立一种快速、准确、敏感的分子生物学检测方法，应用于分子流行病学调查和实验室检测。实时定量PCR方法特异性强、敏感性高，它能够快速的测定样品中的病毒拷贝数，定量准确。因此，建立实时定量PCR检测方法将对临床普查和实验室检测都具有重要的意义。 本研究根据目的基因序列设计引物和探针，制备实时定量PCR试验的标准品。根据实时定量PCR扩增曲线的Ct值绘制标准曲线，建立了两种检测NSl基因、gD基因和gE基因的实时定量PCR方法。 将建立的Taqman探针的实时定量PcR方法进行了样品检测。在某养殖场采疑似病猪的颈静脉血22份，结果在22份血液样品中普通PCR方法检测到19份PPV感染呈阳性的样品，Taqman探针的实时定量PCR方法检测到有20份PPV感染呈阳性的样品，两种方法均检测出血液样品中无PRv感染的样品；在另一养殖场采病猪的淋巴结组织8份，结果在8份组织样品普通PCR方法和Taqman探针的实时定量PCR方法均检测出5份PRV感染呈阳性的样品，在这5份样品中有4份野毒感染呈阳性的样品，3份PPV感染呈阳性的样品。以上结果表明，建立的Taqman探针的实时定量PCR方法比普通PCR方法检出的阳性样品数量多。 本研究建立的猪细小病毒NSl基因和猪伪狂犬病毒gD、gE基因的实时定量PCR检测方法具有快速、准确、敏感的特点，该方法为进一步研发猪细小病毒和猪伪狂犬病毒诊断试剂龠提供一定的理论支持。