论文部分内容阅读
背景:Fc受体是一种膜结合糖蛋白,是联系细胞免疫和体液免疫的枢纽,在许多免疫反应和炎症过程的启动和调节中起着关键作用。Behcet病（Beh?et’s disease BD）和Vogt-小柳原田综合征（Vogt-Koyanagi-Harada syndrome VKH）是我国发病率较高的两种葡萄膜炎“顽症”。目前发病机制尚未完全明确,免疫遗传学方面的研究进展对理解该病的发生发展有着重要的影响。FC受体基因单核苷酸多态性（Single nucleotide polymorphisms SNP）和多种慢性炎症及自身免疫性疾病相关,但其整个家族基因的遗传多态性与BD和VKH的之间的联系尚未阐明。目的:本研究旨在探讨Fc受体家族基因单核苷酸多态性在中国汉族人群中与Behcet病及VKH综合征之间的相关性。方法:本研究根据以往的文献报道选取了FC基因家族中的23个单核苷酸基因多态性位点,分别纳入中国汉族人群中眼部Behcet病患者1022人、VKH综合征患者467人及正常对照组1803人。运用Sequenom MassARRAY?平台和PCR-RFLP方法以及Taq Man?SNP基因分型技术对这23个SNP位点进行分型比较,以期找到Fc基因家族中同Behcet病和VKH综合征相关的阳性位点。之后通过实时荧光定量聚合酶链反应（real-time Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）检测不同基因型正常人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell PBMC）中致病基因的mRNA表达水平,酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay ELISA）评价不同基因型健康人外周血上清中细胞因子的表达水平。结果:在关于Behcet病的第一阶段研究中发现FCGR3A基因rs428888位点的CC基因型频率在Behcet病患者中显著降低(Pc=2.02×10–2,OR=0.551),CT基因型频率在Behcet病中显著高于对照组(Pc=2.02×10–2,OR=1.814)。其他22个SNPs经统计和Behcet病没有相关性。第二阶段扩增样本实验后,统计分析进一步肯定了前期结果。两阶段合并数据分析显示FCGR3A基因rs428888位点的CC基因型和C等位基因频率在Behcet病患者中显著低于正常对照(Pc=1.96×10-7,OR=0.527;Pc=7.22×10-7,OR=0.554),CT基因型频率在Behcet病患者中显著增高(Pc=1.96×10-7;OR=1.897)。第三阶段功能研究显示正常人外周血PBMCs中,rs428888 CT型个体FCGR3A mRNA表达显著高于CC基因型个体（P=0.005）。在脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激的PBMCs中,rs428888位点CT基因型个体中MCP-1,IL-1β和TNF-α的表达较CC基因型个体的表达显著升高（P=0.034;P=0.025;P=0.04）。在关于Fc受体家族基因同VKH综合征相关性的研究中未发现阳性位点及致病基因,故实验终止于第一阶段,未进行后续步骤。结论:我们发现FCGR3A基因的rs428888位点多态性与中国汉族人Behcet病有遗传易感性,可能通过调节FCGR3A基因的mRNA表达水平来影响其发病。