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目的:观察八珍汤对移植人结肠癌HCT116细胞BALB/c-nu裸鼠体重、肝肺转移率及其复发转移中TGF-β1、p-Smad2/3水平的影响,为八珍汤治疗结肠癌浸润转移提供科学依据,为结肠癌的临床复发和转移提供新的分子靶点。
方法:给予正常BALB/c-nu裸鼠建立结直肠癌原位肿瘤模型,运用不同剂量八珍汤中药灌胃治疗,通过观察裸鼠生长状态、体重变化情况,采用HE染色法观察原位瘤及转移灶组织学病变;ELISA检测静脉血中TGF-β1水平;Westernblot检测组织标本p-Smad2/3水平。利用SPSS22.0统计软件包进行统计分析,从组织细胞、分子水平及蛋白质水平初步探讨八珍汤抑制结直肠癌复发转移的机制。
结果:1.裸鼠的生长状态:空白组裸鼠情况最好,八珍汤治疗组次之,模型组则最差。
2.裸鼠存活率的比对:空白组裸鼠无死亡,存活率为100%。模型组中死亡裸鼠2只,存活率为86.7%,死亡率为13.3%;八珍汤低剂量组、八珍汤中剂量组与八珍汤高剂量组分别死亡1只,死亡率均为6.7%。3.各组裸鼠体重变化情况:空白组裸鼠体重随着时间延长逐渐增加,模型组与八珍汤各组裸鼠在给药2周后体重逐渐下降,且模型组下降更明显(p<0.05),八珍汤组内比较,发现用药4周后裸鼠体重出现明显差异,相同时间裸鼠体重大小为:八珍汤高剂量组>八珍汤中剂量组>八珍汤低剂量组,具有统计学意义(p<0.05)。4.肝、肺转移率及造模成功率比较:模型组造模成功率为100%、肝转移率69.2%、肺转移率38.5%,八珍汤低剂量组造模成功率为92.9%、肝转移率61.5%、肺转移率30.8%,八珍汤中剂量组造模成功率85.7%、肝转移率50%、肺转移率25%,八珍汤高剂量组造模成功率85.7%、肝转移率41.7%、肺转移率25%;运用Fisher精确概率法分析发现,各组肿瘤造模成功率、肝转移率及肺转移率无显著差异(p>0.05)。5.病理切片对比:HE染色切片观察,模型组明显可见肿瘤细胞走行紊乱,排列不规则,呈浸润性生长,细胞核大深染呈圆形或椭圆形,多见细胞核分裂相,胞浆多染为红色;八珍汤各组同样可见蓝色深染的肿瘤细胞核以及红色胞浆,核分裂相较模型组少见,走行较为整齐,排列致密相对规整,较模型组细胞异型性小,细胞分布较为分散。6.各组裸鼠血清中TGF-β1水平比较:发现接种癌细胞的各组裸鼠血清TGF-β1浓度明显升高,与空白组比较差异具有统计学意义(p<0.05);而通过八珍汤治疗后,八珍汤各组裸鼠血清中TGF-β1浓度明显下降,与模型组相比有显著差异(p<0.05);八珍汤治疗组内比较,发现高剂量组与低剂量组具有明显差异(p<0.05),中剂量组与低剂量组、高剂量组分别比较差异则不明显(p>0.05)。7.组织标本中p-Smad2/3相对表达量对比:与空白组比较模型组及治疗各组裸鼠原位肿瘤组织、肝转移组织及肺转移组织中p-Smad2/3蛋白水平明显升高(p<0.05)。经过八珍汤灌胃治疗后的裸鼠与模型组比较,发现治疗各组裸鼠原位肿瘤组织、肝转移组织及肺转移组织中p-Smad2/3水平较模型组明显下降(p<0.05)。治疗组内比较无显著性差异。
结论:1.八珍汤可有效抑制裸鼠结直肠肿瘤的生长,降低裸鼠结直肠癌的复发和转移率,且八珍汤高剂量组抑制作用更强。2.裸鼠TGF-β1及p-Smad2/3蛋白的表达水平与肿瘤的进展有关,病情越重其表达水平越高。3.八珍汤可通过抑制TGF-β1及p-Smad2/3的表达进而抑制结直肠癌的增殖及转移,且八珍汤高剂量组更明显,但是其中的机制仍有待于进一步研究。
方法:给予正常BALB/c-nu裸鼠建立结直肠癌原位肿瘤模型,运用不同剂量八珍汤中药灌胃治疗,通过观察裸鼠生长状态、体重变化情况,采用HE染色法观察原位瘤及转移灶组织学病变;ELISA检测静脉血中TGF-β1水平;Westernblot检测组织标本p-Smad2/3水平。利用SPSS22.0统计软件包进行统计分析,从组织细胞、分子水平及蛋白质水平初步探讨八珍汤抑制结直肠癌复发转移的机制。
结果:1.裸鼠的生长状态:空白组裸鼠情况最好,八珍汤治疗组次之,模型组则最差。
2.裸鼠存活率的比对:空白组裸鼠无死亡,存活率为100%。模型组中死亡裸鼠2只,存活率为86.7%,死亡率为13.3%;八珍汤低剂量组、八珍汤中剂量组与八珍汤高剂量组分别死亡1只,死亡率均为6.7%。3.各组裸鼠体重变化情况:空白组裸鼠体重随着时间延长逐渐增加,模型组与八珍汤各组裸鼠在给药2周后体重逐渐下降,且模型组下降更明显(p<0.05),八珍汤组内比较,发现用药4周后裸鼠体重出现明显差异,相同时间裸鼠体重大小为:八珍汤高剂量组>八珍汤中剂量组>八珍汤低剂量组,具有统计学意义(p<0.05)。4.肝、肺转移率及造模成功率比较:模型组造模成功率为100%、肝转移率69.2%、肺转移率38.5%,八珍汤低剂量组造模成功率为92.9%、肝转移率61.5%、肺转移率30.8%,八珍汤中剂量组造模成功率85.7%、肝转移率50%、肺转移率25%,八珍汤高剂量组造模成功率85.7%、肝转移率41.7%、肺转移率25%;运用Fisher精确概率法分析发现,各组肿瘤造模成功率、肝转移率及肺转移率无显著差异(p>0.05)。5.病理切片对比:HE染色切片观察,模型组明显可见肿瘤细胞走行紊乱,排列不规则,呈浸润性生长,细胞核大深染呈圆形或椭圆形,多见细胞核分裂相,胞浆多染为红色;八珍汤各组同样可见蓝色深染的肿瘤细胞核以及红色胞浆,核分裂相较模型组少见,走行较为整齐,排列致密相对规整,较模型组细胞异型性小,细胞分布较为分散。6.各组裸鼠血清中TGF-β1水平比较:发现接种癌细胞的各组裸鼠血清TGF-β1浓度明显升高,与空白组比较差异具有统计学意义(p<0.05);而通过八珍汤治疗后,八珍汤各组裸鼠血清中TGF-β1浓度明显下降,与模型组相比有显著差异(p<0.05);八珍汤治疗组内比较,发现高剂量组与低剂量组具有明显差异(p<0.05),中剂量组与低剂量组、高剂量组分别比较差异则不明显(p>0.05)。7.组织标本中p-Smad2/3相对表达量对比:与空白组比较模型组及治疗各组裸鼠原位肿瘤组织、肝转移组织及肺转移组织中p-Smad2/3蛋白水平明显升高(p<0.05)。经过八珍汤灌胃治疗后的裸鼠与模型组比较,发现治疗各组裸鼠原位肿瘤组织、肝转移组织及肺转移组织中p-Smad2/3水平较模型组明显下降(p<0.05)。治疗组内比较无显著性差异。
结论:1.八珍汤可有效抑制裸鼠结直肠肿瘤的生长,降低裸鼠结直肠癌的复发和转移率,且八珍汤高剂量组抑制作用更强。2.裸鼠TGF-β1及p-Smad2/3蛋白的表达水平与肿瘤的进展有关,病情越重其表达水平越高。3.八珍汤可通过抑制TGF-β1及p-Smad2/3的表达进而抑制结直肠癌的增殖及转移,且八珍汤高剂量组更明显,但是其中的机制仍有待于进一步研究。