单味中药对无乳链球菌生物膜体外抑制作用的研究

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无乳链球菌(Streptococcus agalactiae),即B群链球菌(Group B Streptococcus, GBS),作为一种正常菌群常定植于健康人的鼻咽部、胃肠道及生殖道,但细菌可以通过产道引起新生儿如脑膜炎、败血症、肺炎等严重感染性疾病,此外还可引起孕产妇及非孕成人,尤其是中老年人和免疫低下的病人如糖尿病病人等多种严重感染。另外,无乳链球菌还是引起牛羊等反刍类动物乳腺炎的主要细菌。近年来随着抗生素的大量使用,无乳链球菌对青霉素、氨苄青霉素等的耐药呈上升趋势,对克林霉素、红霉素及左氧氟沙星的耐药较为普遍,其耐药性问题日渐严峻。研究发现,有较大比例的无乳链球菌在体内能形成生物膜,生物膜的形成势必造成感染迁徙、反复,不仅危害人类健康,更给家庭和社会造成沉重的经济负担。因此探索新型的抑制无乳链球菌生物膜形成的药物非常重要。  目的:  1.筛选生物膜阳性的无乳链球菌。  2.从15种中药免煎颗粒中筛选出对无乳链球菌在体外有抑菌活性的中药。  3.观察单味中药对无乳链球菌成熟生物膜的影响。  方法:1.利用刚果红试验和半定量粘附试验对临床分离得到的17株无乳链球菌在体外形成生物膜能力进行筛选,筛选出生物膜阳性菌株;  2.用微量肉汤稀释法测定15种中药免煎颗粒对无乳链球菌的最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration, MIC)和最小杀菌浓度(Minimum bactericidal concentration, MBC)。  3.通过半定量粘附试验和刚果红-阿利新蓝联合染色法观察丁香对无乳链球菌成熟生物膜的干预情况。  结果:1.临床分离的17株无乳链球菌9株可以形成生物膜,生物膜阳性率为52.94%。  2.对丁香(Clove)、知母(Rhizoma Anemarrhenae)、厚朴(Magnolia)、芦根(Reed rhizome)、淡竹叶(Lophatherum gracile)、大青叶(Foliumisatidis)、细辛(asarum)、蛇床子(Cnidium monnieri)、蒲公英(Taraxacum mongolicum)、防己(Stephania tetrandra)、土茯苓(Rhizoma Smilacis Glabrae)、黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)、重楼(Paris polyphylla)、诃子(Terminalia chebula)、高良姜(Alpinia officinarum Hance)等15味中药对无乳链球菌进行体外抑菌活性研究,结果显示丁香对无乳链球菌的抑菌作用最强,其MIC为1.95mg/ml,厚朴、防己、黄芩也有较好的抑菌活性, MIC为7.80~31.25mg/ml;重楼和蛇床子的抑菌活性尚可,其MIC为62.50mg/ml,蒲公英、大青叶、淡竹叶及芦根抑菌活性较弱,其MIC范围为125~500mg/ml;知母、细辛、诃子、高良姜和土茯苓无抑菌作用。  3.半定量粘附试验检测出丁香对无乳链球菌成熟生物膜有抑制作用,刚果红-阿利新蓝联合染色可以观察到药物作用组与未加药物的阴性对照组生物膜量的变化。  结论:  1.临床分离的17株无乳链球菌有较高的生物膜阳性率(9/17)。  2.丁香、厚朴、防己、黄芩在体外对无乳链球菌有较强的抑制作用,知母、细辛、诃子、高良姜和土茯苓无抑菌作用。  3.丁香对无乳链球菌成熟生物膜具有一定抑制作用。
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