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目的:本研究主要为了验证大黄素是否可以对胰腺癌细胞抑癌基因P16、RASSF1A、ppENK发挥一定程度的去甲基化作用,并与5AzA-cdR联合用药是否能够增加5AzA-cdR对胰腺癌细胞Panc1抑癌基因的去甲基化作用。方法:采用CCK8检测不同浓度大黄素对胰腺癌细胞Panc1的生长抑制情况,甲基化特异性 PCR(methylation-specific PCR,MSP)和重亚硫酸盐测序 PCR(bisulfite genomic sequencing PCR,BSP)联合TA克隆测序分别检测大黄素、5AzA-cdR、以及大黄素联合5AzA-cdR对胰腺癌细胞Panc1抑癌基因P16、RASSF1A、ppENK去甲基化状态的影响。Dot-blot实验验证大黄素、5AzA-cdR、以及大黄素联合5AzA-cdR对胰腺癌细胞Panc1细胞基因组5mc的表达的影响,并用FQ-PCR和Western Blot分别检测各组P16、RASSF1A、ppENK三个抑癌基因以及甲基转移酶DNMT1、DNMT3a、DNMT3b在mRNA和蛋白的表达情况。结果:CCK-8证实大黄素可以以浓度和时间梯度的方式来抑制胰腺癌细胞Panc1的生长,Dot-blot结果证实大黄素联合5AzA-cdR用药可以明显抑制Panc1细胞基因组5mc的表达。MSP和BSP结果证实大黄素具有微弱的去甲基化作用,5AzA-cdR具有一定程度的去甲基化作用,但是当大黄素联合5AzA-cdR作用时,其对胰腺癌细胞Panc1抑癌基因P16、RASSF1A、ppENK去甲基化作用更加显著。同时FQ-PCR和WB结果证实大黄素联合5AzA-cdR作用时,P16、RASSF1A、ppENK的表达较两药分别单独作用时表达明显增加,相反地,甲基转移酶DNMT1,DNMT3a较对照组明显减少。结论:研究阐明了大黄素联合5AzA-cdR用药通过减少甲基转移酶DNMT1和DNMT3a的表达来增强5AzA-cdR对胰腺癌细胞抑癌基因P16、RASSF1A、ppENK的去甲基化作用。