异氟醚预处理对肝窦内皮缺血再灌注损伤的保护作用及相关机制

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第一部分 异氟醚预处理对大鼠肝窦内皮常温缺血再灌注损伤的影响 目的:观察异氟醚预处理对大鼠肝窦内皮常温缺血再灌注损伤(IRI)的影响,并探讨线粒体ATP敏感性钾通道(MitoKATP)在其中的可能作用。 方法:1、建立大鼠常温部分肝缺血再灌注损伤模型,造成约70%的肝脏缺血60min、再灌注90min。 2、48只成年健康雄性SD大鼠,随机分为6组,每组8只:(1)假手术组(Sham组),进腹后仅分离肝门周围韧带不阻断血流;(2)对照组(Control组),进腹后行部分肝脏缺血再灌注(I/R);(3)异氟醚预处理组(Iso组),行I/R前予吸入1.5%(1MAC)的异氟醚30min,洗脱10min;(4)5HD+Iso组,在吸入异氟醚之前10min,从右颈内静脉注入5-HD(10mg/kg),其余同Iso组;(5)二氮嗪组(Dia组),在行肝I/R前10min,从右颈内静脉注入Diazoxide(5mg/kg);(6)5-HD+Dia组,在行肝I/R之前20min静注5-HD(10mg/kg),10min后静注Diazoxide(5mg/kg)。 3、再灌注90min时测定各组血清谷丙转氨酶(ALT)、透明质酸(HA)水平,肝脏一氧化氮(NO)、内皮素(ET)含量和一氧化氮合成酶(NOS)、髓过氧化物酶(MPO)活性及核因子κB(NF-κB)结合活性;并进行肝组织病理形态学观察包括光镜HE染色和透射电镜(TEM)超微结构检查;同时用TUNEL标记法检测细胞凋亡,免疫组化检测细胞间粘附分子(ICAM-1)的表达。结果:1、与Sham组相比,Control组的血清ALT和HA水平,肝组织ET含量均明显升高(p<0.05);而肝组织NO含量与NOS的活性(以cNOS为主)均明显降低(p<0.05)。与Control组相比,Iso组和Dia组的ALT和HA水平及ET含量都低(p<0.05),肝组织中NO的含量和NOS活性升高。5-HD部分抵消了Iso的作用,却完全抵消了Dia的作用。两组间NO含量和NOS活性比较,Iso组高于Dia组(p<0.05)。 2、HE染色可见:病理改变以血窦扩张充血和肝细胞变性为主,而细胞坏死相对较少。Control组中血窦明显充血、扩张,出现较多的中性粒细胞,中央
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