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EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)全球范围内正常人群中感染率高达90%以上,中国更是EBV的感染大国。该类疱疹病毒一经感染终身携带,因此,大部分正常人群均存在EBV的潜伏感染。再次激活的EBV能够引发单核细胞增多症等相关疾病,而潜伏感染下的EBV某些病毒组分还与众多肿瘤的发生及发展密切相关。TLRs(Toll-like receptors,TLRs)作为模式受体家族中的关键部分,能够识别外来病原体,并活化产生众多炎症因子及干扰素等激活天然免疫及适应性调节。目前,已有多种TLR7/8的激动剂作为免疫佐剂应用于临床,而部分研究发现EBV与TLRs之间存在潜在联系,EBV能够通过抑制或阻断TLRs通路中某些途径以逃避宿主免疫;另一方面,TLR7/8的活化与EBV生活周期的改变也存在潜在联系,但目前尚无明确分子机理。因此,本文深入探究了TLR7/8活化与潜伏状态EBV之间的关系,对于揭示EBV逃逸宿主免疫监视点的分子机理具有重要生物学意义,同时相关结果也对TLR7/8激动剂的应用范围评价具有一定的理论研究意义和临床应用价值。1.EBV能够限制R848诱导的TLR7/8通路的活化程度。以EBV~-B淋巴瘤细胞Ramos和EBV~+B淋巴瘤细胞IM9为研究对象,使用TLR7/8的激动剂R848诱导后,在两种细胞中的TLR7/8通路活化程度不同。R848刺激后Ramos中TLR7/8通路下游核转录因子NF-k B(Fold Change=92,p=0.024)、炎症因子TNF-α(Fold Change=15,p=0.01)与IL-6(Fold Change=23,p=0.002)、以及Ⅰ型干扰素IFNα(Fold Change=300,p=0.002)与IFNβ(Fold Change=180,p>0.05)在转录水平都显著升高而在R848刺激后的IM9中,NF-k B、TNF-α与IL-6较对照组无明显变化,IRF5、IFNα与IFNβ仅升高4倍左右。2.造成IM9细胞中TLR7/8活化程度受限的原因可能为EBV转录组水平,尤其是立即早期基因的表达量升高。R848能够引起IM9中潜伏状态的EBV部分基因的m RNA水平尤其是起始裂解的立即早期基因(BZLF1、BRLF1)显著升高,且在短期(0-24h)及长期(0-1week)内均呈现动态变化。而R848处理后并无任何裂解复制相关的蛋白的产生,不能诱导EBV从潜伏向裂解状态的转化。此外,R848对于EBV的调控作用还表现在能够降低细胞内/外EBV DNA含量。另一方面,通过CCK8及流式细胞检测发现,R848并未引起宿主IM9的细胞活性、凋亡水平以及细胞周期的改变。因此,在IM9细胞的EBV与宿主相互作用中,EBV m RNA尤其是立即早期基因可能是关键因素。3.EBV引发TLR7/8活化受限的潜在机制可能与立早基因启动子区部分基因甲基化水平改变有关,并存在复杂的病毒宿主互作因素。通过克隆子测序,发现R848诱导立早期基因BRLF1启动子区甲基化水平降低,这可能与立早基因的表达量升高有关;IM9转录组测序结果显示,R848刺激后宿主细胞存在活化的细胞进程等生物学过程,涉及代谢等信号通路;差异表达基因深入分析发现,IER3等基因的表达变化,可能通过影响NF-k B的表达最终导致TLR7/8通路的限制性激活。综上所述,TLR7/8的活化能够诱导EBV转录组水平立早基因等显著上调,其机理可能与BRLF1启动子部分区域的甲基化水平改变有关,并涉及多种生物过程、信号通路和病毒与宿主的相互作用。相关结果为揭示EBV逃逸TLR7/8天然免疫分子机理以及临床免疫佐剂应用范围与抗病毒药物研发提供线索。