幽门螺杆菌对胃癌细胞标miR-200c和RhoA表达的影响

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胃癌(gastric cancer, GC)是最为常见的消化系统肿瘤,是世界范围内癌症-相关死亡的第二大原因,也是我国最常见的恶性肿瘤之一,每年大约有40万新增胃癌病例,死亡约30万人。幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染是胃癌的主要危险因子。  微小核糖核酸-200c(miRNA-200c,miR-200c)属于miR-200家族,主要调控上皮向间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)。研究发现,miR-200c在胃癌组织样本和胃癌细胞株中表达降低,与胃癌生长、增殖、侵袭、转移密切相关。RhoA属于Rho亚家族成员中的小G蛋白,参与了H.pylori感染引起的与细胞动力有关的胃上皮细胞形态学的改变,从而影响胃癌的转移和侵袭。RhoA在胃癌组织中呈高表达,也是miR-200c潜在的靶基因。因此,本研究拟阐明H.pylori对胃癌细胞株miR-200c、RhoA表达的影响及其可能的机制。  目的:  探讨H.pylori对胃癌细胞株miR-200c,及RhoA表达的影响及其可能的机制。  方法:  1.荧光实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测4株胃癌细胞株AGS、BGC-823、HGC-27、SGC-7901中内源性miR-200c的表达水平;  2.西方型H.pylori标准菌株11637与4株胃癌细胞株(AGS、BGC-823、HGC-27、SGC-7901)共培养,RT-PCR检测细胞中miR-200c表达、RhoA mRNA的表达;Western blot检测RhoA蛋白的表达;  3.应用miR-200c类似物,miR-200c抑制物及其相应的阴性对照物分别转染4株胃癌细胞株,RT-PCR检测RhoA的mRNA表达、Western blot检测RhoA蛋白表达的变化。  结果:  1.4株胃癌细胞株AGS、BGC-823、HGC-27、SGC-7901均不同程度表达内源性miR-200c,其中HGC-27细胞表达水平最高,BGC-823、SGC-7901细胞株表达水平相对居中,AGS细胞株表达水平最低。  2.H.pylori与4株胃癌细胞共培养6h、12h、24h、48h后,RT-PCR检测发现,与空白对照组相比,胃癌细胞株AGS、BGC-823、HGC-27、SGC-7901中miR-200c表达均降低(P均<0.05),均以6h时表达最低,AGS、BGC-823、HGC-27、SGC-7901细胞中miR-200c表达分别降低1.83±0.28、1.55±0.18、1.57±0.35、1.95±0.33倍,以后随时间延长逐渐恢复。共培养48h时,与空白对照相比,miR-200c表达仍然是降低的(P均<0.05)。同时,H.pylori显著提高了4株胃癌细胞株AGS、BGC-823、HGC-27、SGC-7901中RhoA mRNA和蛋白的表达(P均<0.05);4株胃癌细胞RhoA mRNA表达分别在24h、48h、24h、12h达最高,分别升高为1.72±0.22、1.94±0.27、1.97±0.26、1.63±0.30倍,以后随时间延长逐渐恢复;4株细胞的RhoA蛋白分别在24h、24h、12h、24h达最高,分别升高4.43±0.06、5.86±0.14、4.84±0.94、7.5±0.01倍,以后随时间延长逐渐恢复。  3.提高4株胃癌细胞中miR-200c的表达,RhoA mRNA表达均无明显改变,但RhoA蛋白的表达均显著降低(P均<0.05);降低4株胃癌细胞中miR-200c的表达,RhoA mRNA的表达同样没有明显变化,但RhoA蛋白的表达均显著提高(P均<0.05)。  结论:  1.H.pylori能够降低胃癌细胞中miR-200c的表达、提高RhoA的表达。  2.改变胃癌细胞中miR-200c表达,可以影响RhoA蛋白表达,并且miR-200c的表达与RhoA蛋白的表达呈负性相关。  3.H.pylori可能通过miR-200c靶向RhoA蛋白而发挥作用。
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