磷脂酶D(phospholipase D,PLD)属于磷脂酶超家族,是作用于磷酰氧键的水解酶,它可以催化磷脂水解反应生成胆碱和磷脂酸。在一定的条件下,还能催化其他含有羟基的物质与磷脂的碱基发生反应,生成新的磷脂。利用磷脂酶D对常见磷脂进行改性,可以生产稀有磷脂,提高生物价值。磷脂酶D广泛存在于自然界的各个群体中,但是由于动物源和植物源的磷脂酶D的提取工艺复杂且杂质多,野生型微生物来源的磷脂酶D产量又及其低,对大规模生产产生局限性,限制了磷脂酶D以及其下游产业的发展。伴随着生物科学技术的发展,目前,人们更倾向于通过分子生物学和基因工程的手段,获得高效表达酶制剂的菌株,进一步研究磷脂酶D的蛋白结构和功能。根据之前的研究发现,链霉菌属的磷脂酶D具有良好的卵磷脂水解活性和转磷脂活性,同时它对酶促反应的底物有较高的耐受性,是目前应用较多的磷脂酶D。在磷脂酶D异源表达的研究中,使用最多的为大肠杆菌表达系统,但是磷脂酶D对大肠杆菌的生长具有抑制作用,并不能大量表达磷脂酶D。本论文对链霉菌磷脂酶D在毕赤酵母中的异源表达进行了探究。实验主要是利用原有的链霉菌PMF-PLD重组质粒,通过双酶切获得磷脂酶D基因,进行了目的基因的克隆、载体构建、大肠杆菌转化质粒提取的方法,获得了表达载体pET-28a-PLD和pPICZαA-PLD,通过转化获得了相应的大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a-PLD和毕赤酵母菌株X-33/pPICZαA-PLD,对链霉菌磷脂酶D的表达进行了探究。通过蛋白表达实验SDS-PAGE以及Western Blot验证,证明了链霉菌磷脂酶D确实可以在毕赤酵母中表达,并获得了相对应的菌株。相对于原核表达系统,磷脂酶D在毕赤酵母等真核表达系统中的异源表达目前仍处于起步阶段,鉴于毕赤酵母在蛋白表达上的独特优势,本研究将为磷脂酶D的高水平表达提供可能性。