过表达miRNA-101的BMSCs通过激活内质网应激调控染尘后AM自噬的机制研究

来源 :华北理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yangzi_job
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的1探讨共培养条件下转染miRNA-101的骨髓间充质干细胞对大鼠肺泡巨噬细胞(Alveolar macrophages of rats,AMs)的内质网应激是否具有保护作用。2通过检测AM内ERS相关标志物的变化,探讨转染miRNA-101的BMSCs发挥作用的可能机制。方法实验分组及模型制备:选取4周龄左右的SPF级雄性SD大鼠全骨髓贴壁法体外培养SD大鼠BMSCs至第三代。使用CD90、CD106、CD45抗体经流式细胞术对BMSCs进行鉴定,构建稳转miRNA-101的BMSCs,CCK-8检测BMSCs,转染miRNA-101的BMSCs,转染空质粒的BMSCs的细胞活性;与经过Si O2刺激的大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383细胞构建transwell共培养体系,上室培养NR8383细胞,下室培养BMSCs,中间隔有通透性的聚碳酸酯膜,孔径为0.4μm;实验分为5组。对照组:NR8383细胞完全培养;模型组:NR8383+Si O2(50μg/ml);BMSCs干预组BMSCs+(NR8383+Si O2)共培养组;miRNA-101组:过表达miRNA-101的BMSCs+(NR8383+Si O2)共培养组;IRE1α抑制剂组:过表达miRNA-101的BMSCs与NR8383+Si O2+STF083010(40μmol/L)共培养组。培养6h、12h、24h、48h时留取NR8383细胞,应用倒置相差显微镜观察BMSCs和NR8383细胞的细胞形态;HE染色和CCK-8试剂盒观察巨噬细胞形态学改变及增殖情况;免疫印迹法检测IRE1α、TRAF2、JNK、LC3、Beclin-1的定量表达;免疫荧光法检测IRE1α、LC3在巨噬细胞中定位。所得数据用SPSS22.0软件进行分析,数据以xˉ±s表示,计量资料应用方差分析,两两比较用t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果1形态学观察:贴壁后BMSCs细胞体积小,呈圆形或三角形,平行分散式生长,传至第三代后,显微镜观察其形态单一,成梭形,细胞质丰富,细胞核清晰。2 NR8383显微镜下可见细胞形状为卵圆形或扁圆形,偶尔能见到不规则细胞,部分悬浮细胞体积较小。3流式细胞仪检测BMSCs表面抗原标志物阳性细胞占比CD106占94.45%,CD90占99.26%,CD45占17.50%,数据提示符合BMSCs特性。4 BMSCs病毒转染效率结果:当MOI=5pfu/细胞时转染效率最佳,此时细胞生长状态良好,呈蜂窝样,说明该转染滴度转染效率较高且不会对细胞生长造成影响。在荧光显微镜下定时进行观察于72h转染达到高峰。5 CCK-8检测BMSCs与转染空质粒的BMSCs细胞活性没有明显差距,无统计学意义(P>0.05),相较于以上两组,转染miRNA-101的BMSCs活性明显增强(P<0.05)。6 HE染色结果:对照组NR8383细胞呈圆形,胞核居中或偏位,胞质颜色均匀,细胞结构清晰。模型组相对于对照组细胞体积增大,胞核偏移,胞质破裂呈不规则毛刺样改变。各干预组较模型组被激惹程度明显降低但仍高于对照组,其中miRNA-101组细胞形态优于BMSCs干预组,IRE1抑制剂组细胞被激惹程度仅低于模型组而高于其他各组。7 CCK-8细胞增殖检测结果:随着培养时间延长,对照组在3-6小时开始增殖,于24小时增殖速度达到顶峰随后速度放缓进入平台期;其他各组细胞增殖趋势与对照组相同,BMSCs干预组和miRNA-101干预组明显优于模型组(P<0.05),IRE1抑制剂组与模型组没有统计学意义,各干预组之间差异不明显,但整体仍低于对照组(P<0.05)。8 Western blot检测结果:对照组LC3、Beclin-1、IRE1、TRAF2及JNK蛋白均未产生明显变化,各时间点仅有基础表达量,模型组各蛋白表达量在6h后开始升高,于24h达到顶峰,在各个时间点均高于同期对照组(P<0.05)。相对于模型组,BMSCs干预组,miRNA-101干预组的各蛋白在各时间点表达显著下降(P<0.05),其中,miRNA-101干预组优于BMSCs干预组(P<0.05)。IRE1抑制剂组中IRE1、TRAF2、JNK蛋白表达量呈低表达,LC3、Beclin-1蛋白表达量仅低于模型组而高于其他各组。9 IRE1、LC3在4个时间点的对照组仅有基础表达,相比同期,模型组的荧光表达量明显增强,BMSCs干预组、miRNA-101干预组和IRE1抑制剂组,与模型组相比,荧光表达量降低,随时间推移呈动态变化。结论过表达miRNA-101的BMSCs通过调控NR8383细胞ERS能有效抑制自噬,对巨噬细胞产生一定保护作用,且效果优于单纯BMSCs治疗。图21幅;表7个;参117篇。
其他文献
目的:本研究选择了两种传统中药——丹参与乌苏里瓦韦,作为主要研究对象,开展抗重症急性胰腺炎活性与机制研究及抗炎活性部位筛选。方法:1.用碱处理以丹参酚酸B为主要成分的
研究目的研究Elabela对人脐带华通胶间充质干细胞(WJ-MSCs)定向心肌样细胞分化的影响以及对APJ表达量的影响。研究方法复苏冻存的人脐带来源的WJ-MSCs,当细胞汇合度达到90%以
研究目的:(1)研究高血压合并舒张功能不全患者中医证型与超声心动图指标、NT-Pro BNP水平的变化,为辨证论治提供客观参考依据。(2)研究风眩III号方治疗阴虚阳亢证患者的疗效,
随着我国加人WTO,护理人员与国外同行的交流越来越多,英语作为一种重要的交流工具发挥着举足轻重的作用。一方面,我们需要学习国外先进的护理理念、护理技术以及本专业发展
会议
第一部分68Ga-DOTATOC在国人正常组织器官的分布特点目的研究68Ga-DOTATOC在国人体内正常组织器官的分布特点。方法回顾性分析2019年2月至2019年8月长海医院行68Ga-DOTATOC P
本文深入研究了氧化硼与氮化铝原位反应的条件及反应过程,并初步探索了反应热压烧结的工艺,在此基础上外加一定量BN制备出一系列BN-Al_2O_3复合陶瓷,主要研究了氮化硼含量对材料的微观组织结构,室温力学性能以及高温性能的影响,阐明了BN-Al_2O_3复合陶瓷在高温下的性能变化规律,提出了BN-Al_2O_3复合陶瓷的高温质损机制。通过对氧化硼和氮化铝反应的热力学与动力学研究表明,反应过程分阶段进
本论文以秦岭南坡锐齿栎、油松、桦木和云杉四种林分为研究对象,采用野外调查、室内测定和统计分析相结合的方法,探讨了立地因子对土壤有机碳和全氮含量的影响,主要结论如下:(1)秦岭南坡主要林分类型土壤有机碳含量和全氮含量均为A层显著高于B层高于C层(P<0.05)。(2)秦岭南坡油松和桦木林土壤A、B、C三层有机碳含量均随海拔的升高而增加,而锐齿栎林土壤A、B、C三层有机碳含量随海拔升高呈先升后降
目的:通过比较非变应性鼻炎(Non-Allergic Rhinitis,NAR)患者采取鼻用类固醇激素或鼻用类固醇激素联合白三烯受体拮抗剂治疗前后的鼻腔分泌物细胞学检查结果和症状评分,试图
目前高职院校的护理英语教学还不能满足护理工作的实际需要,本文提出护理实训室情境交际教学模式。把临床护理英语教学分为基础护理和专项护理两个板块,从内、外、妇、儿四个
本研究以秦岭南坡主要林分(锐齿栎、油松、桦木和云杉林)为研究对象,采用野外采样、室内测定和数理统计分析相结合的方法,探讨了秦岭南坡主要林分类型林下土壤有机碳和速效养分的含量水平和分布特征,另外,分析了四种不同林分类型土壤有机碳和速效养分与相关环境因子之间的关系,主要结论如下:(1)秦岭南坡主要林分类型土壤有机碳密度(SOCD)的变异系数高达0.49,表明该地区SOCD空间变异较大。土壤A、B和C层