目的:将狭鳕鱼皮胶原蛋白肽和透明质酸应用于水凝胶材料的制作,研制一种生物相容性好、安全性高、经济适用的组织工程支架材料。方法:用甲基丙烯酸酐分别与胶原蛋白肽和透明质酸在一定条件下进行加成反应合成凝胶前体材料。通过在材料前体溶液中加入光引发剂I2959和细胞悬并用365nm紫外照射和的方法可以使材料完成光交联,并实现人脐带间充质干细胞的包埋培养。通过扫描电子显微镜观察不同浓度下凝胶内部的空隙大小;通过二乙酸荧光素染色在镜下观察凝胶表面所培养的细胞的存活情况及形态;通过二乙酸荧光素染色观察凝胶内部所培养的细胞的存活情况;用Ed U染色法检验材料在溶解状态下对细胞的生长有无不良作用;用Ed U染色法对比不同浓度凝胶内部细胞的增殖情况,了解凝胶浓度与细胞生长情况之间的关系;用MTT实验检测不同培养时间点凝胶内细胞的活力,并根据所测得的数值绘制细胞生长规律的曲线;用免疫荧光染色对细胞骨架蛋白β-acting进行染色,以对凝胶内部细胞的形态及轮廓进行观察。结果:扫描电子显微镜下可见凝胶的孔隙随着凝胶浓度的增加而减小;二乙酸荧光素染色示凝胶表面及内部培养的细胞均存活良好,并成球生长;Ed U染色显示,合成后的材料在溶解状态下对细胞无明显不良影响;丙烯酸-胶原蛋白肽浓度分别为30g/L、50g/L、100g/L的三组水凝胶中,丙烯酸-胶原蛋白肽浓度30g/L组中细胞核用Ed U染色阳性率最高,并且,随着凝胶浓度的增加,Ed U染色阳性的细胞核数目呈下降趋势。β-acting免疫荧光染色显示凝胶内部培养的细胞成球生长;MTT实验表明贴壁生长的细胞增殖只维持到了第6天,而凝胶中培养的细胞在培养结束时的第8天仍然保持着明显的增值趋势;二乙酸荧光素染色表明材料表面及内部培养的细胞在培养的初期均为成球生长,但随着培养时间的延长,凝胶内部会有少量细胞呈现出梭形或多角形。结论:经丙烯酸酐加成后的狭鳕鱼皮胶原蛋白肽和透明质酸能够制成水凝胶。检测结果表明,凝胶表面和凝胶内部培养的间充质干细胞均生长良好。相对于二维贴壁生长的细胞,凝胶内成球生长的细胞能够持续保持增殖,充分体现出三维培养的优势。在不同浓度的凝胶中,丙烯酸-胶原蛋白肽浓度为30g/L、丙烯酸-透明质酸浓度10g/L时,凝胶内细胞的增殖最为活跃,并且细胞的增殖活跃程度随着凝胶浓度的增加而降低。凝胶内部的细胞在培养初期,凝胶内部的细胞呈现球形,而随着培养时间的延长,边缘有部分细胞开城呈现梭形,提示材料可能具有一定的可黏附性,但为什么仅在凝胶边缘出现梭形的细胞,有待进一步实验证明。