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第一章不明原因复发性流产与CD4+CD25+调节性T细胞表达及Th1、Th2关系的临床研究目的:探讨临床上不明原因复发性流产与CD4+CD25+调节性T细胞表达及Th1、Th2的关系方法:严格按照不明原因复发性流产的判定标准制定纳入排除标准,选择临床研究对象45例;同时选择正常妊娠孕妇作为对照组。收集研究对象的外周血,采用流式细胞仪检测CD4+CD25+调节性T细胞比例、采用ELISA法检测Th1型细胞因子(IFN-γ、IL-2)与Th2细胞因子(IL-4、IL-10)的表达水平;采用RT-PCR方法检测Foxp3 m RNA在两组外周血中的表达量。结果:流式细胞术结果显示,对照组CD4+CD25+调节性T所占比例约为(7.95±1.13)%,流产组CD4+CD25+调节性T所占比例约为(4.06±1.53)%,组间具有显著性差异;ELISA检测结果显示,与对照组相比,流产组患者IFN-γ和IL-2水平显著性升高、IL-4和IL-10水平显著性降低;表现为对照组的IFN-γ/IL-4值为(0.41±0.15),流产组为(0.89±0.21),对照组的IL-2/IL-10比值(0.43±0.18),流产组为(0.96±0.19),两组比值均有显著性差异;对全部样本RT-PCR结果进行统计分析发现,与对照组相比,流产组的Foxp3表达水平显著降低,组间具有显著性差异。结论:URSA患者血液CD4+CD25+调节性T所占比例显著降低,Th1/Th2的比值升高,且Foxp3表达水平显著降低,这些均可能作为URSA患者的监控指标之一。第二章不明原因复发性流产应用主动免疫结合孕激素治疗的临床效果评价目的:探讨临床上,孕激素结合主动免疫治疗对URSA患者CD4+CD25+调节性T细胞表达及Th1、Th2的影响方法:严格按照不明原因复发性流产的判定标准制定纳入排除标准,选择52例接受孕激素结合主动免疫治疗作为治疗组,45例作为流产组。治疗组患者经过主动免疫治疗,封闭抗体BA转阳后妊娠过程中给黄体酮治疗。流产组未经过上述任何治疗,直接进行入组。收集研究对象的外周血,采用流式细胞仪检测CD4+CD25+调节性T细胞比例,采用RT-PCR检测Foxp3的表达量,采用ELISA法检测Th1及Th2细胞因子的表达水平,化学发光法检测血清孕酮水平,同时患者随访统计妊娠结局。结果:流式细胞术结果显示,流产组CD4+CD25+调节性T所占比例约为(4.13±0.35)%,治疗组(7.09±0.90)%,组间具有显著性差异;与流产组相比,治疗组的Foxp3表达水平显著升高;ELISA检测结果显示,与流产组相比,治疗组患者IFN-γ和IL-2表达水平显著性降低,IL-4和IL-10表达水平显著性升高;经过孕激素结合主动免疫治疗后,患者血清孕酮水平明显高于对照组;治疗组妊娠成功率为86.54%,显著性高于流产组的66.67%;成功分娩率治疗组95.55%,显著性高于流产组的46.67%。结论:孕激素结合主动免疫治疗是治疗URSA的有效方法,其治疗机理可能与CD4+CD25+调节性T所占比例、Th1/Th2表达比值有关。第三章不明原因复发性流产小鼠模型CD4+CD25+调节性T细胞表达及Th1、Th2的关系研究目的:探讨孕激素结合主动免疫治疗对不明原因复发性流产小鼠模型CD4+CD25+调节性T细胞表达及Th1、Th2的影响。方法:选择CBA/JXDBA/2J小鼠、CBA/J×BALB/c小鼠模型。治疗组小鼠经过主动免疫治疗,妊娠过程中给黄体酮治疗;流产组未经过上述任何治疗。采用流式细胞仪、RT-PCR、Western blot及ELISA等生化方法检测各个指标;HE染色观察子宫内膜的组织学变化,免疫组化检测子宫中潜在靶点蛋白PGR和Foxp3的表达情况。结果:与对照组相比,流产组CD4+CD25+调节性T所占比例在脾脏内及外周血内显著降低、治疗组显著升高;Western blot结果显示,流产组的小鼠Foxp3蛋白表达显著性下降,治疗组小鼠的Foxp3蛋白表达显著性升高,接近于对照组小鼠,差异具有显著性;RT-PCR检测结果显示,流产组的小鼠Foxp3 m RNA显著性下降,治疗组小鼠的Foxp3 m RNA显著性升高;ELISA检测结果显示,治疗组小鼠IFN-γ和IL-2表达水平显著性降低,IL-4和IL-10表达水平显著性升高;HE染色结果显示,流产组的小鼠子宫内膜厚度降低,出现炎症细胞浸润,腺体数量减少;治疗组小鼠子宫内膜厚度有所增加,炎症细胞浸润减弱,腺体数量增加;免疫组化结果显示,流产组小鼠PGR蛋白表达水平显著性降低,治疗组小鼠子宫PGR蛋白表达量提高;对照组小鼠子宫表现出较强的Foxp3蛋白表达,流产组小鼠PGR蛋白表达水平显著性降低,治疗组小鼠子宫PGR蛋白表达量提高。结论:孕激素结合主动免疫治疗可显著改善URSA小鼠的免疫状态,可作为治疗小鼠URSA的有效方法,其治疗机理可能与孕激素蛋白受体PGR、Foxp3的表达调节炎症因子与T细胞有关。