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目的:研究表明,脑缺血导致的神经炎症反应是加重脑组织损伤的重要因素之一,抑制神经炎性有望成为减轻脑缺血损伤的有效策略。文献及课题组前期研究均表明,天麻具有抗脑缺血损伤的作用,并已证实,该作用由天麻所含的一组酚性成分共同发挥,其中有部分成分具有显著的抗炎作用,而天麻抗脑缺血损伤的作用是否与其抗炎作用有关尚不清楚,因此,本论文在前期研究的基础上,对具有抗脑缺血损伤的 3 个天麻酚性成分的抗炎作用及机制进行了研究。方法:1. 天麻酚性成分 B、C、D 的抗炎作用研究采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型,考察天麻酚性成分 B、C、D 的抗炎作用;分别采用大鼠足底注射角叉菜胶或花生四烯酸复制大鼠足趾肿胀模型,初步鉴别天麻酚性成分 B、C、D 抗炎作用的途径。2. 天麻酚性成分 B、C、D 抗脑缺血致脑内炎症损伤的作用研究采用颈内动脉注射花生四烯酸诱发同侧大脑半球脑血栓形成方法复制大鼠急性脑缺血损伤模型,以大鼠神经功能损伤程度评分及脑组织中前炎症因子TNF-α和 IL-1β的含量为指标评价天麻酚性成分 B、C、D 的抗炎作用。3. 天麻酚性成分 B、C、D 抗脑缺血致脑内炎症损伤的机制研究3.1 天麻酚性成分 B、C、D 抗炎作用途径的研究采用颈内动脉注射花生四烯酸诱发同侧大脑半球脑血栓形成方法复制大鼠急性脑缺血损伤模型,ELISA 法检测脑组织中花生四烯酸代谢的 COX 途径产物TXA2、6-keto-PGF1α和 5-LO 途径产物 LTB4、Cys LTs 的含量,分析天麻酚性成分B、C、D 抗炎作用的途径。3.2 天麻酚性成分 C、D 对脂多糖致 BV-2 细胞异常活化的作用研究培养 BV-2 细胞,绘制细胞生长曲线;MTT 法测定天麻酚性成分 C、D 和LPS 对 BV-2 细胞存活率的变化情况,倒置显微镜下记录 LPS 刺激细胞后形态的变化情况;硝酸还原酶法检测细胞培养上清液中 NO 的含量;ELISA 法检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β含量变化情况;Western Blot 法检测检测5-LO在BV-2细胞内表达情况以及 ELISA 法检测 5-LO 途径产物 LTB4、Cys LTs 的含量,通过以上研究,分析天麻酚性成分 C、D 是否可通过抑制 BV-2 细胞异常活化而发挥抗炎作用。结果:1. 天麻酚性成分 B、C、D 的抗炎作用研究结果表明,成分 B、C、D(30、20mg/kg)均能显著的抑制二甲苯诱导的小鼠耳廓炎症反应,与模型组比较有统计学意义(p<0.01);成分 B (20mg/kg)可以显著降低角叉菜胶诱导的大鼠足趾肿胀(p<0.01),该作用可持续 4h,平均抑制率为 42.56%,但对 AA 诱导的大鼠足趾肿胀,成分 B 仅在 1h 及 2h 时具有抑制作用;成分 C、D 对角叉菜胶诱导的大鼠足趾肿胀无明显抑制作用;对 AA 诱导的大鼠足趾肿胀,成分 C、D (20mg/kg)均具有显著抑制作用(p<0.05),平均抑制率分别为 33.5%和 31.7%。2. 天麻酚性成分 B、C、D 抗脑缺血致脑内炎症损伤的作用研究结果表明,对急性脑缺血模型大鼠神经病学症状,成分 B(20 mg/kg)具有显著改善作用(p<0.05),成分 C 有改善趋势,而成分 D 无明显作用;成分 B、C、D(20mg/kg)均可显著降低急性脑缺血模型大鼠脑组织内前炎症因子 TNF-α和 IL-1β的含量。3. 天麻酚性成分 B、C、D 抗脑缺血致脑内炎症损伤的机制研究3.1 天麻酚性成分 B、C、D 抗炎作用途径的研究结果 表明, 成分 B 可显 著降低急 性脑缺血 损伤大鼠 脑组织 TXA2、6-keto-PGF1α的含量(p<0.01,p<0.05),对 LTB4、Cys LTs 的含量无明显影响;成分 C、D 对急性脑缺血损伤大鼠脑组织 TXA2、6-keto-PGF1α含量均无明显影响,但均可明显降低脑组织中 LTB4、Cys LTs 的含量(p<0.01,p<0.05)。3.2 天麻酚性成分 C、D 对脂多糖致 BV-2 细胞异常活化的作用研究结果表明,成分 C、D(50μg/m L)能显著减少由 LPS(2μg/m L)刺激 BV-2细胞释放的 NO 水平(p<0.01);成分 C 可降低细胞释放 TNF-α和 IL-1β的水平(p<0.01,p<0.05);成分 D 能显著降低细胞释放 TNF-α的水平(p<0.01,p<0.05),对 IL-1β释放仅在 50μg/m L 有抑制作用(p<0.01);成分 C、D 对 LPS 刺激 BV-2细胞胞内 5-LO 表达均无明显影响,但能抑制 LTB4和 Cys LTs 的释放,与模型组相比有统计学意义(p<0.01,p<0.05)。结论:1. 天麻酚性成分 B、C、D 均具有不同程度的抗炎作用;成分 B 的抗炎作用与抑制花生四烯酸代谢的 COX 途径有关;成分 C、D 的抗炎作用与抑制花生四烯酸代谢的 5-LO 途径有关。2. 天麻酚性成分 B、C、D 减轻大鼠急性脑缺血损伤的作用与减轻脑内炎症反应有关。3. 天 麻 酚 性 成 分 B 减 轻 脑 内 炎 症 反 应 与 抑 制 COX 途 径 的 TXA2、6-keto-PGF1α有关,成分 C、D 减轻脑内炎症反应与抑制 5-LO 途径的 LTB4和Cys LTs 有关。4 天麻酚性成分 C、D 可通过抑制 BV-2 细胞异常活化达到抑制神经性炎症的作用,它们可以抑制 5-LO 途径的产物 LTB4和 Cys LTs 的释放,但其作用机制与抑制 5-LO 蛋白表达关系不明显。