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沙门氏菌(Salmonella)是一大群寄生于人类和动物肠道内的革兰氏阴性杆菌,不仅能导致动物疾病,还能使人类发生伤寒、副伤寒、败血症、肠胃炎等疾病。国外曾发生过严重的龟源性沙门氏菌感染人的事件。随着乌龟作为宠物饲养的数量不断提高,龟源性沙门氏菌在中国也越来越存在着潜在的公共卫生的威胁。本研究旨在建立一种检测宠物乌龟沙门氏菌的PCR的方法。本研究的试验样本来自于2008年7月至2009年8月期间到中国农业大学动物医院就诊及学校附近的花鸟市场的乌龟,共64只,所选病例要求未使用过抗生素。按照世界卫生组织(WHO)及国际标准化组织(ISO)推荐的沙门氏菌检测方法对分离培养的每株细菌进行生化鉴定。然后对鉴定后的细菌用K-B琼脂扩散法进行药敏试验。试验结果:检测64只乌龟,18只龟检出携带沙门氏菌,沙门氏菌的携带率为28.1%。其中家养宠物乌龟44只,5只检出携带沙门氏菌,携带率为11.3%;另外20只乌龟采自花鸟市场,13只检出携带沙门氏菌,沙门氏菌携带率为65%。药敏试验结果:宠物乌龟沙门氏菌的耐药性比较严重,对某些常用抗生素的耐药性高达70%以上:氨苄西林(74%)、四环素(79%)、磺胺甲恶唑/甲氧苄啶(70%)。对克拉维酸/阿莫西林不敏感(37%)。沙门氏菌对头孢曲松、阿米卡星、头孢噻吩及恩诺沙星的敏感性高达99%,可以作为临床治疗的首选药物。本研究首次建立宠物乌龟沙门氏菌PCR检测方法并应用于临床样品。根据沙门氏菌属invA基因序列设计一对引物,建立用于检测宠物乌龟沙门氏菌的PCR方法。结果:对购买的标准菌株和7种非沙门氏菌菌株进行PCR扩增,标准沙门氏菌扩增出372bp的特异性条带,非沙门氏菌菌株未扩增出任何条带。通过电泳判定结果,该法可检出体系最低扩增2.4×102cfu/ml的沙门氏菌说明该方法敏感性高。PCR产物经测序证实为invA基因,与对比序列具有非常高的同源性,说明该PCR检测方法具有较高的特异性。对来自动物医院及花鸟市场的230个细菌菌株进行检测,检测出135个乌龟沙门氏菌阳性样品,乌龟沙门氏菌阳性率为58.7%。本研究为宠物乌龟沙门氏菌属的检测提供了简洁、敏感、特异的新方法。