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一、IPF和非IPF患者肺成纤维细胞表面Thy-1的表达及在TGF-β刺激下的表达差异目的:建立肺成纤维细胞的培养方法,为肺纤维化的发病机制和治疗措施体外研究提供细胞技术平台;探索IPF和非IPF患者肺成纤维细胞株的亚群差异。方法:采用肺组织块接种培养法,培养的细胞通过相差显微镜和透射电镜观察形态、免疫细胞化学染色检测细胞表型标记蛋白等进行鉴定,流式细胞术检测各种情况下表面Thy-1的阳性率,并用流式分选系统(FACS)分选出Thy-1(-)细胞。结果:培养的IPF患者成纤维细胞株细胞呈梭形,单个核,多突起,有伪足,边缘清晰整齐,贴壁生长,表达波形蛋白(vimentin)和平滑肌肌动蛋白(α-SMA),不表达角蛋白(cytokeratin)和结蛋白(desmin)。电镜观察到胞质中有丝状a-SMA纤维。IPF成纤维细胞株的表面抗原Thy-1阳性率明显低于正常成纤维细胞株,并分成明显的Thy-1阳性和阴性两个亚群。TGF-β刺激后IPF成纤维细胞株的Thy-1的阳性率降低比正常细胞株明显。结论:原代培养的IPF患者成纤维细胞株细胞含有肌成纤维细胞(MyoF)并且可以传代,可分选出Thy(-)细胞,为后续实验提供了基础。成纤维细胞表面抗原Thy-1的阳性率在纤维化肺组织和正常肺组织是有显著差异的,经TGF-β刺激后其差异更加明显。二、表观遗传药物5-氮杂胞苷、丙戊酸钠对肺成纤维细胞增殖及分化的影响目的:探索表观遗传药物对IPF患者肺成纤维细胞株的干预影响,以期为肺纤维化的治疗提供一个新的选择。方法:用DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂胞苷和组蛋白乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠处理IPF患者肺成纤维细胞株,地塞米松为对照。用噻唑兰MTT细胞增殖实验定量检测细胞株的增殖和药物的细胞毒性情况。分别应用流式细胞技术、免疫细胞化学法观察各药刺激前后该细胞株表面Thy-1表达的变化和细胞平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达差异。结果:IPF患者肺成纤维细胞株在DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂胞苷处理24小时后可明显抑制增殖,5μmol/l作用48小时后表面抗原Thy-1的阳性率上升为93.7%±1.95%,5μmol/l处理5天后α-SMA的阳性率下降为49.2%±6.4%(p＜0.05)。在丙戊酸钠处理24小时后显著抑制增殖,10 mg/ml作用48小时后表面抗原Thy-1的阳性率上升为95.5%±2.21%,10 mg/ml处理5天后α-SMA的阳性率下降为36.6%±6.9%(p＜0.05)。地塞米松虽然可明显抑制IPF患者肺成纤维细胞株的增殖,5μmol/l剂量作用24小时后表面抗原Thy-1的阳性率上升为87.7%±1.46%,但在5μmol/l剂量作用5天后α-SMA的阳性率为86.3%±4.9%(p＞0.05)。结论:表观遗传药物DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂胞苷和组蛋白乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠能够抑制IPF患者肺成纤维细胞株的增殖,在相应的亚细胞毒性剂量上可导致细胞表面抗原Thy-1的表观上调,使肌成纤维细胞的特征标记物平滑肌肌动蛋白α-SMA表达降低。在肺纤维化的治疗中具有应用前景。