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目的:积雪草酸(Asiatic acid,ASA)是中药材积雪草的主要化学成份之一是五环三萜类化合物。研究显示积雪草酸具有很好的肝保护作用,本研究采用硫代乙酰胺(TAA)诱导小鼠肝纤维化模型,采用不用刺激物活化肝星状细胞,小鼠巨噬细胞以及人单核巨噬细胞,探讨积雪草酸通过Lipin1-TLR4-NLRP3信号通路对肝纤维化的改善作用和具体的调控机制。方法:腹腔注射TAA(200mg/kg或100mg/kg),共五周,制作小鼠肝纤维化模型。并每天灌胃小鼠以不同剂量的积雪草酸(5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg),每天灌胃,连续4周。最后一次给药18h后,获得小鼠血清和肝脏,保存于存于-80℃冰箱。用血清检测试剂盒测定血清中谷丙氨酸转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)的水平。肝脏组织做H&E染色、Masson染色、天狼猩红染色与IHC免疫组织化学4种方法染色,观察肝组织病理学改变。检测肝纤维化指标α-SMA与炎性因子TLR4和Lipin-1/2的蛋白与mRNA表达水平。对数生长期的大鼠肝星状细胞(HSC),首先用TGF-β(10 ng/ml)激活1 h,然后孵育以不同剂量的积雪草酸(1.56、3.125、6.25、12.5、25 μmol/L)6 h,提取细胞总蛋白,做蛋白印迹(Western blotting)分析,检测α-SMA与TLR4、Lipin-1/2等蛋白表达水平。同时取对数生长期小鼠巨噬细胞(Raw264.7)与人单核巨噬细胞(THP-1)细胞,用LPS(1ng/ml)刺激1h使细胞活化,然后孵育以不同剂量的积雪草酸(6.25、12.5或25 μmol/L)6h,进行细胞免疫荧光实验与蛋白印迹分析,测定TLR4、Lipin-1、P2X7R等蛋白表达水平。结果:在体内实验中,与硫代乙酰胺模型组相比,积雪草酸抑制了硫代乙酰胺导致的肝纤维化小鼠血清中ALT、AST活性的升高;积雪草酸抑制了硫代乙酰胺诱导的α-SMA、Collagen-Ⅰ的表达,同时下调TIMP-1/MMP-13的比率:积雪草酸显著下调TLR4-Lipin-1,激活Lipin2的表达。在体外细胞实验中,积雪草酸剂量为1.65-25μmol/L时对大鼠肝星状细胞无细胞毒性,积雪草酸能够明显的α-SMA,TLR4,Lipin1的表达,并增加Lipin2的水平。LPS是类脂多糖类物质,能够刺激小鼠巨噬细胞(Raw264.7)产生炎性因子,诱导活化单核巨噬细胞(THP-1)。与单独给予LPS刺激相比,给予LPS活化的 Raw264.7 与 THP-1 细胞在不同浓度(1.56、3.125、6.25、12.5 和 25μM)的积雪草酸孵育后,积雪草酸能显著抑制Lipin-1活化,积雪草酸剂量为25 μM时,对其抑制效果更为显著:TLR4、P2X7R也具有相同效果。给予活化的肝星状细胞积雪草酸孵育后,25μM积雪草酸能够显著降低α-SMA,Collagen-Ⅰ的蛋白水平;剂量为6.25、12.5、25的积雪草酸能够抑制TLR4的表达进而抑制Lipin-1的表达。结论:积雪草酸(ASA)可能通过激活Lipin2抑制TLR4,进而抑制Lipin-1和P2X7R的表达进而改善硫代乙酰胺诱导的肝纤维化,并且通过抑制α-SMA抑制肝星状细胞的激活。由CD14提呈的LPS,能与Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)结合,并且成复合体,诱发炎性细胞的活化。本研究发现,LPS可以通过CD14内化与TLR4共同进入细胞内体,进而发挥其对单核/巨噬细胞的活化作用。因此,本研究旨在探讨LPS-TLR4复合物的内化途径及其对LPS活化巨噬细胞的作用及可能机制。LPS通过激活Raw264.7与THP-1细胞,激活脂质代谢因子Lipin-1的表达,进而激活TLR4信号通路。所以积雪草酸通过有效地抑制Lipin-1与P2X7R的表达进而抑制TLR4/IRAK4的表达。