大鼠大网膜血管内胰岛细胞移植实验研究

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糖尿病(diabetes mellitus,DM)是影响人类健康的重大疾病之一。其治疗方法包括口服药物、胰岛素注射以及异体胰腺器官移植和胰岛移植等。胰腺器官移植技术复杂,围手术期并发症发生率高,手术适应症仍局限于糖尿病合并肾功能衰竭,需同时行胰肾联合移植者,且仅在全球较大的器官移植中心开展。以胰岛移植为代表的细胞替代治疗具有手术易操作,创伤小的优点;而且与胰岛素注射治疗相比,成活的胰岛移植物可受机体血糖实时调控,即时释放胰岛素,维持机体的血糖稳定,防止DM肾病、视网膜病变等并发症的发生。1999年埃德蒙顿(Edmonton)方案的实施使胰岛移植的疗效得到了显著提高,标志着DM治疗进入了现代胰岛移植的新阶段。   胰岛移植部位要求可重复,安全有效。多数胰岛移植采用经皮穿刺,经肝动脉或门静脉灌注入肝的方法。但潜在并发症有出血,门静脉血栓形成,门脉高压等。大网膜具有血运好、能腹腔镜下微创化操作,可以多次、重复移植的特点。本研究旨在探讨大鼠大网膜血管内胰岛移植物的建立及对DM模型大鼠血糖的影响。   第一部分、大鼠胰岛的分离,纯化,功能鉴定。   目的:探讨大鼠胰岛分离和纯化的方法及乌司他丁对提高大鼠胰岛分离量的作用。   方法:随机选取10只SD雄性大鼠,按不同的胰岛分离,消化或纯化方法,分为2组,每组5只。A组:胆总管灌注胶原酶V+Ficoll纯化; B组:胆总管灌注胶原酶V+Ficoll+乌司他丁5000U/L。   结果:A组获得的胰岛大部分外膜较完整,部分边界不清;B组获得的胰岛外膜完整,边界清楚,结构致密。胰岛数量多,而且含有一定数量的胰岛细胞团。   结论:消化过程中加入乌司他丁可提高胰岛分离的质量和数量,纯化后的胰岛数量多,外膜完整,边界清楚,结构致密。   第二部分、四氧嘧啶诱发大鼠糖尿病的实验研究。   目的:建立适应实验要求的动物大鼠DM模型。   方法:选取健康大鼠30只,体重250~300g,随机分3组:1、2实验组,3对照组。实验1、2组腹腔注射四氧嘧啶,注射剂量分别为150mg/kg,100mg/kg(按体重计算),48h后,分别经鼠尾静脉空腹取血0.5ml,离心后保留血清,测定并记录血糖值、胰岛素、血清C肽值。   结果:实验1、2组大鼠血糖值、胰岛素、血清C肽与对照组比较,经秩和检验,差异有显著性(P<0.05)。   结论:大鼠腹腔注射四氧嘧啶,建立DM模型是一种可靠,易控制的方法。血糖的升高与体重,鼠龄有关。   第三部分、大鼠大网膜血管内胰岛移植物的建立及对糖尿病模型大鼠血糖影响的实验研究。   目的:探讨大网膜血管内胰岛移植物建立的方法,及对DM大鼠血糖的影响。   方法:DM大鼠模型20只,随机分为2组,每组10只。对照组:10只DM大鼠模型,每只剖腹,大网膜血管内注射法移植,约0.3ml NS。实验组:10只DM大鼠模型,每只剖腹,大网膜血管内注射法移植,约4~5×106个大鼠胰岛细胞。   结果:实验组与对照组相比,术后第6d,两组血糖值比较,差异有显著性(18.4±2.5mmol/l v.s 24.3±2.6mmol/l,P<0.01);术后第14d,降至最低,血糖平均值<16.7mmol/l;术后第18d,实验组与对照组相比血糖值的表达差异有显著性(18.7±3.8mmol/l v.s 25.1±2.9mmol/l,P<0.01)。两组相比,术后第6d内,体重变化差异有显著性(210.5±11.5g v.s 182.6±18.4g,P<0.05)。两组胰岛素水平、血清C肽、体重比较,差异有显著性(P<0.05),两组大鼠胰腺病理有明显形态变化。   结论:大鼠大网膜血管内灌注同种异体胰岛细胞,具有一定的存活率。成活的移植物可以影响大鼠的血糖代谢。
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