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当归补血汤(DBT)是中医药经典方剂之一,具有一定的补气补血和免疫增强等功效。但DBT在兽医临床应用较少,且效果不明确,尤其对DBT中药发酵产物作为饲料添加剂研究尚处空白。本论文拟开展枯草芽孢杆菌(B.subtilis)发酵DBT的工艺研究,利用高效液相色谱(HPLC)法测定DBT发酵前、后相关活性成分含量变化,明确DBT发酵产物对肉鸡生长、免疫、抗氧化性能和小肠绒毛形态的影响,以及对SD大鼠肠道菌群多样性的调控作用,旨在为DBT发酵产物作为新型饲料添加剂提供理论依据。1.B.subtilis发酵DBT的工艺参数优化。采用单因素和Box-Behnken中心组合试验考察了发酵培养基组分、菌液接种量和发酵时间对多糖提取率的影响。最终确定最佳发酵工艺条件为葡萄糖添加量0.95%,蛋白胨添加量1.52%,接种量2.92%,发酵时间35.8 h。该条件下多糖提取率达到9.23±0.067%,高于未发酵组(4.6±0.057%)。2.HPLC法测定DBT发酵前、后相关活性成分的含量变化。采用HPLC-DAD法测定阿魏酸和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量,使用Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱,柱温为30℃,流动相A:0.2%甲酸溶液,流动相B:乙腈,梯度洗脱:0~10 min,82%A;10~20 min,82~90%A,流速为0.8 mL/min;进样量为10μL;发现与未发酵DBT相比,DBT发酵提取物中阿魏酸含量和毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量分别显著增加了43.94±0.92%和14.10±2.38%(P<0.01)。3.DBT发酵产物对肉鸡生长、免疫、抗氧化性能和小肠绒毛形态的影响。试验选用1日龄健康、体重相近的白羽肉鸡210只,随机分成5组:饲喂基础日粮的对照组、日粮中添加1.0%DBT药粉的未发酵组、日粮中分别添加0.5%、1.0%和2.0%DBT发酵产物的发酵组。发现与对照组和未发酵组相比,1.0%的DBT发酵产物可显著降低肉鸡日采食量(ADFI)(P<0.05)和料肉比(FCR)(P<0.05),提高肉鸡平均日增重(ADG)(P<0.05)。同时,法氏囊指数、新城疫抗体效价以及血清中IL-2、IL-6、TNF-α、INF-γ、SOD、GSH-Px和T-AOC含量都显著升高(P<0.05)。此外,1.0%发酵组的绒毛高度/隐窝深度比值显著高于对照组和未发酵组(P<0.05)。4.DBT发酵产物对SD大鼠肠道菌群多样性的调控作用研究。将SD大鼠随机分成4组:对照组、B.subtilis组、未发酵组和发酵组,每组6只。采用高通量测序技术对粪便微生物16S rRNA进行分析。发现四个组共识别出3483个操作分类单元(OTUs),其中各组共有1236个OTUs,最丰富的门是拟杆菌门(Bacteroidetes)(29.65~38.19%)和厚壁菌门(Firmicutes)(48.30~67.04%),且与其他实验组相比,DBT发酵产物能显著上调植物乳杆菌(Lactobacillus)的丰度,下调另枝菌属(Alistipes)和副拟杆菌属(Parabacteroides)等病原菌的丰度。综上研究,利用B.subtilis发酵DBT可以显著提高多糖、阿魏酸和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量,日粮中添加1.0%的DBT发酵产物能够显著改善肉鸡的生长性能,并可积极改善大鼠的肠道菌群结构关系,促进肠道有益菌生长,并抑制致病菌的繁殖,为DBT发酵产物作为新型饲料添加剂提供了理论依据和技术支撑。